Laboratorio de histologia

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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BAJA CALIFORNIA ENSENADA, VALLE DORADO

Primer reporte de laboratorio
Laboratorio de histología

12 de agosto de 2011 Ensenada, B.C.

OBJETIVO Identificar los espacion de laboratorio y explicar el funcionamiento básico de los diferentes aparatos, orservando las características de cada uno y correlacionando su función y los procedimientos que se realizan paraprepar los tejidos (técnicas histológicas) y comprender la importancia de su observación al microscopio de luz (M.L) MARCO TEORICO Microscopia Electronica Se encuentras dos tipos de microscopios electrónicos que son los que nos proporcionan datos morfológicos y analíticos de células y tejidos: en MET (microscopio electrónico de Transmision) y el MEG ( microscopio electrónico de barrido). Son losprimeros adelantos de la microscopia electrónica respecto de la micoscopia óptica ya que la longitud de onda del haz de electrones es unas 2.000 veces menor que la del haz de luz, con los que su resolución aumenta por un factor de 103 El microscopio de electrónico de transmisión produce una interaccion de un haz de electrones con el tejido o muestra para producir una imagen la óptica del microscopioelectrónico de transmisión es muy similar al óptico con la excepción que el MET utiliza un haz de electrones en lugar del haz de luz, el principio del microscopio es el siguiente:  Una Fuente, como es un filamento de tungsteno calentado que emite electrones (cátodo) Los electrones son atraídos hacia un ánodo.  Una diferencia eléctrica entre el catodo y el anodo imparte un voltaje de aceleración deentre 20.000 y de 200.000 voltios a los electrones, con los que se genera un haz. Este haz de electerones atraviesa una serie de lentes electromagnéticos que cumplen la misma función que los lentes de cristal de un microscopio óptico.





La lente condensadora es la que le va dar forma al haz de electrones que va alcanzar el plano de la muestra y va cambiar su diámetro. Entonces mientrasel haz que atraviesa la muestra se enfoca y aumente po un lente objetivo para que después vuelva a se aumentado por un lente proyector de ellos. La imagen que se obtiene al final se mira en una pantalla fosforescente. Las partes que el haz de electrones atravezo se observar claras, y las partes que absorvieron el haz de electrones como los metales pesados aparecen obscuras. por arriba o por debajode la panta visora se puede colocar una placa fotográfica o un detector de video para registrar la imagen de la pantalla de modo permanente.

En la preparación de las muestras para la MET es muy simiral a la de la microscopia óptica excepto por que tiene la necesidad de métodos mas refinados. Los principios que se utilizan en la preparación de cortes para su examen con el Microscopioelectrónico de transmisión son los mismos que de la microscopia óptica con la restricción de que en cada paso debe trabajar con muestras 3 a 4 veces menores o mas delgadas que las que se utilizan en la microscopia óptica. El MET, cuyo has de electrones tiene una longitud de onda de alrededor de 0,1 nm, posee una resolución teórica de 0,05 nm. Dada la excepcional resolución del MET, la calidad de lafijación, es decir el grado de consercacion de la estructura subcelular, tiene que ser la mejor que se pueda conseguir.

transmisión comienza con la fijación en glutaraldehido seguida por un enjuague en una solución amortiguadora (buffer) y la fijación con tetroxido de osmio

El glutaraldehido, un dialdehido, preserva las proteínas al establecer enlaces cruzados entre ellas; el tetroxido de osmioreacciona con los tejidos, en particular los fosfolipidos. El osmio también imparte densidad electrónica a las estructuras celulares y tisulares porque es una metar pesado, lo cual mejora la formación ulterior de la imagen en el MET. De modo ideal, los tejidos deberían perfundirse con glutaraldehido amortiguado antes de ser extirpados del animal. Pero lo mas común es que para el MET se fijen piezas...
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