Mètodes Utilitzats Tradionalment Per Aigües

Mètodes utilitzats
tradionalment per aigües
OBJECTIU: En aquesta pràctica aprendrem a analitzar aigües a partir d’una sèrie de mètodes usats tradicionalment i veurem com s’utilitzen i en quins casos. Aquests mètodes són : recompte en placa per a bacteris aerobis, mètode del nombre més probable (NMP) i mètode del recompte en tub de clostridis sulfit-reductors.

Mètode 1 : Recompte en placaper a bacteris aerobis
Aquest mètode està basat en el recompte de colònies crescudes en una placa de volum determinat d’aigua, amb temps i temperatura concrets d’incubació.
Amb aquest mètode buscarem Aerobis Mesòfils en una mostra d’aigua contaminada amb femtes de gat.

MOSTRA:
Aigua tipus II amb solució Ringer i amb mostra de femta de gat.

MATERIAL:
Plaques de petri
Tub d’assaigTaps
Pipeta pasteur
Vas de precipitats Balança analítica ( Kern)
Autoclau ( P Selecta 121ºC 1 atm)
Estufa





REACTIUS:
Solució Ringer ¼ (Biokar beauvais france)
Agar TSA (Scharlau) Aigua tipus II


PROCEDIMENT:
En primer lloc es prepara el medi que utilitzarem en aquest mètode. Primer dissolem els grams corresponents de TSA en un vas de precipitats amb aigua tipus II.Després aquesta dissolució s’aboca a una ampolla que escalfarem , sense arribar a bullir, al microones durant uns 30 segons.
Un cop fet això, s’aboca el contingut de l’ampolla en els 4 tubs d’assaig (uns 20 ml per tub), un per cada placa, es tapen els tubs i es posen a l’autoclau a esterilitzar. Un cop ho hem tret del autoclau ho deixem refredar fins a 50ºC ( quan ho agafem amb la mà i comptemfins a 15 ) i llavors ja es pot abocar a les plaques.
Agafem amb una pipeta 1 ml de mostra i la posem a una de les plaques i llavors aboquem a sobre els 20 ml d’agar TSA, tanquem la placa i homogeneitzem. Deixem reposar la placa fins que solidifiqui.
A continuació es posen les plaques a incubar. Posem 2 plaques a incubar a 37ºC durant 48 hores i 2 plaques a incubar a 22ºC durant 72 hores.
Uncop passat aquest temps es treuen les plaques de les estufes i es conten les colonies que han crescut. Es donen els resultats en ufc / ml.


Mètode 2 : Recomptede Coliformes i Enterococs per NMP
En aquest segon mètode utilitzarem una sèrie de proves presumptives i proves confirmatives.
Les proves presumptives no indiquen necessàriament la presencia del grup bacterià a determinar, sinó unapresumpsió que s’haurà de confirmar després. La seva negativitat, en canvi si indica l’absència del grup bacterià en la nostra aigua.
La prova presumptiva és un mètode de tipus general per a qualsevol grup bacterià, i en canvi la prova confirmativa és de tipus específic.

GRUPS BACTERIANS PROVES MEDIS DE CULTIU


COLIFORMES TOTALS
Presumptiva
Brou Lactosat


Confirmativa

Agar EMBCOLIFORMES FECALS - BGBB


ESTREPTOCOCS FECALS
Presumptiva

Brou de Rothe

Confirmativa
Brou de Litsky

MOSTRA:
Aigua tipus II amb solució Ringer i amb mostra de femta de gat.

MATERIAL:
Plaques de petri
Tub d’assaig
Taps
Micropipetes (1 ml , 100 μ )
Vas de precipitats
Bunsen Balança analítica ( Kern)
Autoclau ( P Selecta 121ºC 1 atm)
Estufa
Campana de DurhamNansa de sembra


REACTIUS:
Solució Ringer ¼ (Biokar beauvais france)
Agar Eosin Methylene Blue Agar (EMB) (Scharlau)
Ethyl Violet Azide Broth (EVA BROTH)
Litsky (Scharlau)
Oxidase Reagent Test Strips. 9421502F
Lot-44797 Aigua tipus II
Agar TSA (Scharlau)
Lactose Broth (Scharlau)
Brillant Green Bile 2% Broth (BGBB)
(Scharlau)
Azide DextroseBroth acc to Rothe
(Scharlau)
McConkey Broth (Scharlau)


PROCEDIMENT:
En primer lloc prepararem els diferent medis necessaris per les diferentes proves que farem per cada grup de bacteris.
Primer prepararem els medis per saber si tenim estreptococs fecals en la nostra mostra. Preparem 9 tubs de brou de Rothe, els 3 primers a doble concentració de medi i els 6 següents a...