métodos para estudiar celulas

Métodos de estudio de la
células

Métodos de estudio de la células

1. MÉTODOS DE VISUALIZACIÓN Y
DETECCIÓN




Microscopía
Marcaje radioactivo y no radioactivo
Técnicas inmunológicas

2. MÉTODOS DE SEPARACIÓN Y
SELECCIÓN




Centrifugación
Cromatografía
Citometría de flujo

3. MÉTODOS DE AMPLIFICACIÓN


Cultivos celulares

1. Métodos de visualizaciónMétodos de estudio de la células

Técnica de producir imágenes visibles de estructuras o detalles
demasiado pequeños para ser percibidos a simple vista.

∼1610
Galileo (italianos)

Micro = pequeño
Scopein = ver

Jansen (holandeses)

1. Métodos de visualización

Métodos de estudio de la células

ANTONY VAN LEENWENHOEK
En el siglo XVII describe por primera vez protozoos, bacterias,espermatozoides y glóbulos rojos

1. Métodos de visualización

MICROSCOPIOS DEL SIGLO XVIII

Métodos de estudio de la células

1. Métodos de visualización

Métodos de estudio de la células

1. Métodos de visualización



Utiliza luz visible.



Magnificar la imagen de un objeto con la ayuda de dos juegos
de lentes (oculares y objetivos).



Resolución: Capacidad dedistinguir dos puntos que a simple
vista parecen uno solo. R=0.61/AN (capacidad de captar luz).



Las células no solamente son pequeñas, también son
translúcidas e incoloras, por esta razón deben ser: fijadas y
teñidas... pero matan la célula.
Fijadores: Alcohol, formaldehído, carnoy
Colorantes: Eosina, azul de metileno, orceina

1. Métodos de visualización

Métodos de estudio de lacélulas

OBJETO  COLORANTES ESPECIFICOS  AUMENTAN CONTRASTE

No células vivas

1. Métodos de visualización

Métodos de estudio de la células

 contraste entre las partes claras y oscuras de las células sin colorear
Consta de un dispositivo, situado dentro o debajo del condensador, que produce
diferencias de longitud de onda en los distintos rayos.

Diferencias de los IR en lasdistintas partes de una célula
y de tejido.

Campo luminoso

1. Métodos de visualización

Métodos de estudio de la células

Distribución intracelular de moléculas.
Fluorocromo

Es útil para marcar una molécula dentro del espectro de luz visible

1. Métodos de visualización

Métodos de estudio de la células



No se observan estructuras en detalle



Se puede observarcélulas vivas



Seguimiento del ciclo, lugares de síntesis, etc

INMUNOFLUORESCENCIA
A.Fluorescente + Anticuerpo
Antígeno + (λ) → Fluoresce

1. Métodos de visualización

Métodos de estudio de la células

DAPI

rodamina

GFP

1. Métodos de visualización

Métodos de estudio de la células

(1955 Marvin Minsky)
Cortes ópticos finos a muestras de téjidos  reconstruccióntridimensional
Microscopía de fluorescencia con la captura y digitalización de imágenes con un computador

Análisis tridimensional de estructuras

Métodos de estudio de la células

1. Métodos de visualización

hipotálamo de ratón

Músculo de rata

Grano de polen

1. Métodos de visualización

Métodos de estudio de la células

1. Métodos de visualización

Métodos de estudio de lacélulas

Resolución limitada del microscopio óptico  1931 Max Knoll y Ernst Ruska

Utiliza electrones en lugar de fotones

imágenes de objetos pqñs




Funciona con eLongitud de onda depende de V a la que se mueven.
Posee mayor resolución porque la  de los e- es   más corta
que la de la luz visible.

1. Métodos de visualización

Métodos de estudio de la células

•40.000 veces más que el poder de resolución del microscopio de luz
• 2 x 106 veces el PR del ojo humano

condensador
Lentes magnéticas
Vacio evita

desviación de los e-

Rayos
electrónicos se
debilitan según el
espesor

Enfocar haz de e-

objeto

Métodos de estudio de la células

1. Métodos de visualización

Microscopio electrónica de transmisión (TEM)
(Transmission...