Mantenimiento de cepas y cultivos

CONSERVACION DE
BACTERIAS

CAROLINA MANZANO VILLEGAS


ENSAYOS
MICROBIOLÓGICOS

INDICE

1. METODOS DE CONSERVACIÓN DE BACTERIAS
(2-9)
2. MANTENIMIENTO DE CEPAS Y CULTIVOS
(9-16)
3. RESISTENCIA DE LAS BACTERIAS A SER ESTERILIZADAS
(16-17)

4. CELULAS MADRE
(17-18)

5. BIBLIOGRAFÍA
(19)

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1. METODOS DE CONSERVACIÓN DE BACTERIAS

Los tres objetivos que hay quealcanzar para conservar correctamente las cepas
microbianas en los laboratorios de microbiología son: que el cultivo a conservar sea
puro, evitando que se produzcan contaminaciones durante el proceso de conservación;
que durante el tiempo de conservación sobrevivan al menos el 70-80% de las células, y
por último, que estas células permanezcan genéticamente estables. Los dos primeros
objetivos no sonmuy difíciles de conseguir cuando se conoce bien la técnica
microbiológica, pero el tercero puede presentar dificultades, y este es el motivo por el
cual existen varios métodos de conservación para los microorganismos, y ninguno de
ellos es de utilización general. Vamos a resumir estos métodos agrupándolos en tres
apartados, que son: Métodos de elección o de conservación a largo plazo,métodos
alternativos y métodos restringidos.

A.- Métodos de elección o de conservación a largo plazo.
Son los mejores porque en ellos se paraliza el crecimiento de las células microbianas,
pero éstas no han muerto. Así se garantiza al máximo la estabilidad genética, por
evitarse la aparición de generaciones sucesivas. Aun así no se puede descartar algún
cambio originado por el método preparatorioen sí mismo. Los métodos de conservación
pertenecientes a este grupo son dos: Congelación y liofilización.

a) Conservación por congelación.
Se congelan las células en suspensión en un líquido con un agente crioprotector y se
guardan a temperaturas inferiores a cero grados centígrados, con lo que el agua se
congela. De esta forma, al no disponer las células de agua en forma líquida, no haycrecimiento. Cuando se quiere trabajar con las células así conservadas, se recuperan
subiendo la temperatura. Este es el mejor método de conservación desde todos los
puntos de vista, pero tiene el inconveniente de requerir aparatos especiales, y además
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existe el peligro de que algún fallo del sistema produzca una subida no deseada de la
temperatura durante el almacenamiento. Tambiénresulta ser el método más molesto
para realizar el envío de las cepas. Los cuatro factores que influyen en la viabilidad y
estabilidad de las células conservadas por este método son los siguientes:
1º.- Edad de las células: En la mayoría de los casos conviene utilizar células maduras
del inicio de la fase estacionaria de la curva de crecimiento, pero cuando se trate
de organismos que presentenen su ciclo vital algún estado que les prepare para
la resistencia a condiciones adversas, es preferible alcanzar este estado. Esto
sucede en el caso de microorganismos que esporulan, en algunos pleomórficos e
incluso en algunos más sencillos.

2º.- Velocidad en la congelación y descongelación: Aunque hay programas de
congelación bien estandarizados para determinados casos o circunstancias,en
general es mejor que las variaciones de la temperatura sean rápidas, tanto para la
congelación como para la descongelación, por lo que para descongelar conviene
poner las células a 37ºC.

3º.- Temperatura de almacenamiento: Debe ser lo más baja posible. Lo mejor es
guardar tubos cerrados o sellados, que contengan las células microbianas,
sumergidos en nitrógeno líquido, que tiene unatemperatura de –195ºC, o bien en
la fase gaseosa del nitrógeno líquido, con una temperatura de

–140ºC.

En el mercado existen variados tipos de armarios congeladores, de los cuales los
más aconsejables son los que alcanzan temperaturas por debajo de –70ºC.
Aquellos que sólo alcanzan temperaturas entre –20ºC y –40ºC, como ocurre con
la mayoría, no son aconsejables, entre otras cosas porque...