manual de inmunohematologia

Manual de Practicas de Laboratorio.
 
Práctica No. 1
Tipificación del sistema ABO
 
Objetivo: Al término de la práctica el alumno determinara los cuatro grupos sanguíneos en sangre del sistema ABO.

 Generalidades: En la membrana del glóbulo rojo existen complejos químicos que representan los llamados grupos o factores sanguíneos Fué Landsteiner quién realizó en 1900 el importantedescubrimiento de que los eritrocitos del hombre pertenecen a varios sistemas Antigénicos diferentes, este autor descubrió el sistema A B O.
                    La clasificación del grupo sanguíneo está, determinada por la presencia o ausencia de los aglutinógenos en el eritrocito y las  aglutininas en el suero. Para la identificación del grupo sanguíneo ABO se deben hacer dos investigacionesconsecutivas: la primera se llama tipado globular y es la determinación de los aglutinógenos eritrocíticos con antisueros o aglutininas conocidas, la segunda se llama tipado sérico o contratipado y es la identificación de las aglutininas utilizando glóbulos rojos con antisueros conocidos, los sueros patrones deben ser de alto titulo, estos sueros pueden ser preparados en el laboratorio o en su defecto, seconsiguen en las casas comerciales de productos biológicos. La investigación de los aglutinógenos eritrociticos se deben realizarse por el método de  tubo de ensayo.
                    Se utilizan tres reactivos llamados: suero anti A (de sangre b), de color azul y que contiene aglutininas alfa, suero anti B (de sangre a), de color amarillo y que contiene aglutininas beta,  existe además otrosuero, el anti AB que contiene las dos aglutininas, alfa y beta.
 Fundamento: Los antígenos de los hematíes son estructuras químicas que proporcionan propiedades específicas a su superficie y que solo pueden detectarse con anticuerpos que corresponden a esos antígenos la mayoría de estas reacciones antígeno-anticuerpo implican la aglutinación o hemólisis de los hematíes.
  Material y equipo:
Ø 1gradilla
Ø 16 tubos 10 x 75
Ø 4 tubos 13 x 100
Ø 4 pipetas Pasteur con  bulbo
Ø Centrifuga clínica
Ø Centrífugas Serofuge
Ø Sueros hemoclasificadores Anti-A, Anti B. Anti-AB
Ø Albúmina bovina al 22% o 33%
Ø Solución fisiológica en Pizeta
Ø Sangre problema
 
Tipificación en tubo.
 
Técnica:
1. Se prepara una suspensión de glóbulos rojos al 5%, previamente lavado en soluciónfisiológica.
2. En una gradilla colocar 4 tubos de ensaye de 10 x 75, marcados con las letras A, B, AB y Control.
3. En cada tubo poner una gota de suspensión de glóbulos rojos al 5%.
4. En el tubo marcado con A poner una gota de suero anti A, en el tubo marcado con B, poner una gota de suero anti B, en el tubo AB una gota de suero anti AB
5. Se debe hacer un control agregando a 1 tubo con una gota dealbúmina bovina al 22 %
6. Mezclar perfectamente los tubos y dejar reposar por dos minutos.
7. Mezclar nuevamente y se procede a centrifugar a 2,500 r p m durante un minuto
8. Se sacan los tubos cuidadosamente de la centrifuga evitando que se mezclen los glóbulos rojos que quedan depositados en el fondo de los tubos y para efectuar la lectura se sacuden cuidadosamente el botón del fondo, uno poruno buscando si existe aglutinación macroscópica.
9. Si la aglutinación tuvo lugar, puede comprobarse en el seno del liquido claro los hematies que nadan y se flotan formando pequeños agrupamientos, si el resultado es negativo los glóbulos rojos se distribuyen uniformemente por el líquido.
10. El resultado se reporta de acuerdo a la intensidad del grupo y al color del      liquido sobre nadante,de una o varias cruces, hasta cuatro.
11. Si existe duda en la lectura se podrá observar al microscopio una gota o        también se pueden incubar los tubos a 37° C. durante 30 minutos.
 
 
Contratipado sanguíneo o prueba de Wiener
 
Objetivo: Al contrario de las: pruebas anteriormente descritas que emplean sueros testigos, esta prueba utiliza glóbulos rojos testigos tipo A, B y AB en...