MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO



CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO
Industrial y de Servicios No. 59










MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO



NOMBRE DEL PROFESOR: José Manuel Agis Vázquez
MATERIA: Aplicar Técnicas de Valoración del Metabolismo
NOMBRE DEL ALUMNO:


GLUCOSA
Objetivo: Llevar a cabo la determinación de la glucosa en sangre para el diagnóstico de la diabetes mellitus, o parallevar su tratamiento de forma adecuada.
Introducción
La determinación de los niveles de glucosa fue el primer procedimiento empleado en el laboratorio clínico médico. Fue introducida por Keilin y Hartree en 1948. Más tarde Keston reportó el uso de un reactivo combinando glucosaoxidasa-peroxidasa, seguido por el de Teller adicionando un reactivo cromogénico al procedimiento de Keston.
La glucosaes oxidada en presencia de glucosa oxidasa (GOD). El peróxido de hidrogeno formado, reacciona bajo la influencia de peróxidasa (POD) con fenol y 4-aminoantipirina para formar un complejo rojo-violeta de quinona. La intensidad del color es proporcional a la concentración de glucosa.
Procedimiento
1. Coloque en cubetas los siguientes volúmenes y mezcle bien

Reactivo Blanco
EstándarMuestra(suero)
Reactivo
1. 0 ml
1.0 ml
1.0 ml
Estándar

0.01 ml

Muestra


0.01 ml

2. Incube por 5 minutos a 37°c o por 10 minutos a temperatura ambiente.
3. Lea a 500 nm antes de 60 minutos.
4. Para calcular usar la siguiente formula:

Dónde:
AM= Absorbancia de la muestra
AE= Absorbancia del estándar

Material y Equipo
Espectrofotómetro
Baño María
Pipeta serológicas
ReactivoCubetas
Tubo de ensayo


Preguntas
1. ¿Para qué sirve la determinación de la glucosa?
R= Para prevenir y diagnosticar la Diabetes Mellitus
2. ¿Quien introdujo esta determinación al laboratorio?
R=Keilin Hartree
3. ¿De qué depende la intensidad del color generado al mezclar el reactivo con el suero problema?
R= De la concentración de glucosa
4. ¿A qué longitud de onda se lee la reacción?R= A 500 nm
5. ¿Durante cuánto tiempo y a que temperatura se incuba la reacción?
R= Por 5 minutos a 37°C o por 10 minutos a temperatura ambiente.













UREA
Objetivo: Determinar los niveles de urea presentes en la sangre para evaluar si hay un daño hepático o renal.
Introducción
La urea es el principal producto de desecho del catabolismo de proteínas. Es sintetizada enel hígado a partir del amonio, el cual es producido como resultado de la desaminación de aminoácidos. Normalmente, el nitrógeno de urea en la sangre comprende sólo el 45% del nitrógeno no protéico. La importancia de la determinación del Nitrógeno de urea es su valor como buen indicador del funcionamiento hepático y renal.
El procedimiento Bun de Stanbio es una modificación del método descritopor Sampson. La urea se convierte catalíticamente a carbonato de amonio por acción de la ureasa. La velocidad de reacción depende de la concentración de deshidrogenasa glutámica. La velocidad de reacción de esta segunda reacción es dependiente de la primera y puede medirse por la velocidad de conversión de NADH a NAD por el cambio de absorbancia a 340 nm.
Procedimiento para BUN
1. Colocar elespectrofotómetro a 340 m, con agua destilada calibrar a 0 de absorbancia y 100 de transmitancia.
2. Colocar el reactivo en un tubo de ensayo y pre incubar 3 minutos a 37°C.
3. Adicionar 0.01 ml de suero problema y agita levemente.
4. Leer la A1 a los 30 segundos.
5. Después leer la A2 a los 60 segundos.
6. Calcular la diferencia de A2 menos A1.
7. Formulas:



Material y EquipoEspectrofotómetro
Baño María
Pipeta serológica
Tubo de ensayo
Cronometro
Reactivos
Pipeta


Preguntas
1 ¿Qué es la urea?
R= Es el producto de desecho de las proteínas.
2 ¿A partir de que sustancia se sintetiza la urea?
R= del Amonio
3 ¿Se pre incuba? ¿Si es así, cuanto tiempo y a que temperatura?
R= Si, 3 minutos a 37°C
4 ¿Qué funcionamiento evalúa el BUN?
R=Evaluación renal y...