medios de cultivo

MEDIOS DE CULTIVO


CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden ser clasificados en:

1. Por su estado físico en:

• Sólidos cuando contiene entre 1,2 a 1,5% de agar
• Semisólidos, que tienen entre 0,3 a 0,8% de agar
• Líquidos, llamados caldos, cuya concentración de agar es 0 a 0,1%

2. De acuerdo a su aplicación en:

• Medios comunes o simples: quepermiten el desarrollo de la mayoría de las bacterias sobre todo las no exigentes, como el caldo peptonado, el caldo nutritivo o el agar nutritivo.

• Medios especiales: que se forman a partir de un medio simple y se les añade diversas sustancias de acuerdo a la finalidad deseada:

• Medios de enriquecimiento: permiten el crecimiento de un mayor número de bacterias, se utiliza cuando el inóculo omuestra tiene un número reducido de ellas, ej. caldo tripticasa soya, caldo selenito, medio de hemocultivo.

• Medios enriquecidos: cuando se les adiciona sustancias de mayores contenidos nutritivos como sangre de carnero, sangre de conejo, sangre de caballo, huevo, extracto de levadura, etc., permitiendo cultivar bacterias que son exigentes en sus necesidades nutricionales, Ejs.: Agar sangre decarnero para el desarrollo de Streptococcus; Medio de Ogawa para el aislamiento de Mycobacterium tuberculosis; Agar chocolate para el crecimiento de Neisseria.

• Medios selectivos: tienen la finalidad de favorecer el desarrollo de un tipo de bacterias y al mismo tiempo inhibir el crecimiento de otras. Para esto se les añade al medio de cultivo sustancias llamadas inhibidores, como pueden serlas sales biliares, colorantes, sustancias químicas e inclusive antibióticos. Ejemplos con el agar SS para el aislamiento de Salmonella y Shigella, Agar TCBS para el cultivo de Vibrio cholerae, y el agar Mac Conkey donde solo crecen enterobacterias.

• Medios diferenciales: son los que permiten identificar y/o clasificar a las bacterias, observando la actividad del microorganismo frente a uno omás substratos y observando su actividad viendo el crecimiento, o el cambio de un indicador de pH. Ejemplos son el agar Triple Sugar Iron (TSI), el Lysine Iron agar (LIA) y el agar Citrato de Simmons, que se utilizan en la identificación de enterobacterias.

• Medio de Transporte: se utiliza para trasladar las muestras desde el sitio de obtención de la muestra hasta el laboratorio para serprocesado. Ejemplos: Medio de Amies con Carbón y el medio de Cary y Blair.

Muchas veces, se combinan las características de cada uno de estos tipos de medios y tener uno que puede ser, por ejemplo, enriquecido y selectivo a la vez como el Medio de Thayer Martin, que es un agar chocolate al cual se añadido un suplemento de antibióticos que permite aislar Neisseria gonorrhoeae y evitar la florabacteriana acompañante.


PREPARACIÓN DE MEDIOS

Los pasos generales

Corrientemente para la preparación de un medio de cultivo se siguen los siguientes pasos:
• Pesado del medio en polvo.
• Rehidratación con agua destilada.
• Disolución completa (con ayuda del calor en el caso de que se trate de un medio que contenga agar).
• Distribución en frascos o tubos (si es necesario, dependiendo deltipo de medio).
• Esterilización, que puede ser en la autoclave a 121°C, a 15 libras de presión y por 15 minutos o por filtración. Algunos medios que son sensibles al calor pueden ser solo calentados y luego distribuidos en placas (plaquéo).
• Enfriar a 50 – 55 °C.
• Adicionar suplementos de enriquecimiento (sangre, plasma u otros) o suplementos selectivos (antibióticos, sustancias químicas).
•Plaquéo o distribución en tubos.

Estos pasos varían dependiendo del tipo de medio, por lo que siempre se debe seguir las indicaciones que se encuentran en la etiqueta del frasco o en los manuales de los fabricantes y los de preparación de medios.

Los medios deshidratados

Los medios deshidratados son higroscópicos y sensibles a la humedad, el calor y la luz. Se deterioran con los cambios...