Membrana y mecanismo de transporte



Universidad Andrés bello
Departamento de ciencias biológicas
Laboratorio de fisiología celular
Profesor: Juan Antonio Valdés







Laboratorio n°1

Membrana y mecanismos de transporte
Bio-135-1









Integrantes: fecha de entrega: 01/04/13

Diego arias
DanielHenríquez
Esteban Vásquez


Introducción


La célula está rodeada de una membrana que está compuesta en su mayoría de lípidos y proteínas, formando una bicapa, la cual su principales funciones es darle forma a la célula y el intercambio de sustancia con el medio extracelular. Para que puede interactuar la célula con el medioextracelular existen varios camino , por ejemplo el transporte activo el cual requiere energía por que las moléculas viajan en contra del gradiente de concentración . También tenemos el transporte pasivo el cual no requiere energía y se divide en otros tres tipos, difusión simple que es el paso de gases como el O2 o el CO2 además de moléculas no polares, otro transporte es la difusiónfacilitada requiere de un transportador como una proteína la cual permite pasar moléculas de gran tamaño como la glucosa, el otro método de transporte es la osmosis la cual consiste en el transporte de agua.
El agua puede entrar atreves de acuaporinas que son proteínas que permiten el paso de agua a la célula, el agua entra por el gradiente de concentración.Objetivos

El primer objetivo es poder diferenciar las formar que tiene los eritrocitos a las distintas concentraciones de NaCl. Luego debemos calcular los osmolaridad de las distintas concentraciones de Nacl. También debimos obtener las membranas celulares de los eritrocitos y determinar las concentraciones de las proteínas.

Desarrollo y metodología

1) Osmosis

Recibimos un tubode centrifuga con sangre anti coagulada y a 3 tubos diferentes colocamos 30 mL de sangre con una micropipeta para luego agregar 60 mL de una solución de NaCl (l), uno al 0.4%, otro al 0.9% y otro al 1.9%.
Luego Incubamos las disoluciones por 5 minutos a temperatura ambiente y luego colocamos un poco de cada muestra a un portaobjeto diferentes y las observamos en un microscopio (40X).

2)Transporte activo: Bomba de Calcio

a) Tomamos 300 mL de sangre y la colocamos en un nuevo tubo de centrifuga y centrifugamos la muestra de sangre por 5 minutos a una velocidad de 1000 revoluciones por minuto.
Formándose una fase acuosa y un pellet dentro del tubo de centrifuga, eliminamos la fase acuosa mediante el uso de una micropipeta.
Luego le agregamos al pellet 500 mL de una solución delisis y luego incubamos la disolución a temperatura ambiente por 5 minutos.
Luego centrifugamos la disolución por 10 minutos a una velocidad de 1400 revoluciones por minutos.
Quedando nuevamente una fase acuosa y un pellet, eliminamos la fase acuosa quedando solo un pellet amarillo/blanco.
Luego le agregamos 100 mL de una solución de resuspencion al pellet y lo incubamos en hielo.

b) Obtuvimos10 mL del extracto de membrana a un nuevo tubo de centrifuga y le agregamos 250 mL de la solución A.
Luego incubamos la disolución por 5 minutos a 50°C en un baño maría.
Después de los 5 minutos, sacamos la disolución del baño maría y le agregamos 50 mL de una solución B para luego incubarlo a temperatura ambiente por 5 minutos.
Al pasar los 5 minutos le agregamos 750 mL de una solución C ynuevamente incubamos la disolución en un baño maría por 5 minutos a 50 °C.
Luego calculamos la absorbancia de la solución a 650nm.
c) Tomamos una muestra de 50 mL de extracto de membrana y luego a esa muestra le agregamos 450 mL de una solución ensayo y luego incubamos la disolución en un baño maría a 37°C durante 5 minutos.
Luego le agregamos 500 mL de Biomol Green para luego incubarlo por...