Metabolismo 2 2
Páginas: 5 (1222 palabras)
Publicado: 20 de diciembre de 2015
Metabolismo y diagnóstico molecular
Enzimología I
Estudiantes
Martínez Ospina Jefrey Steven 201523052 MEDICINA Y CIRUGÍA (3660)
Motta Martínez María Isabel 201528449 MEDICINA Y CIRUGÍA (3660)
Muriel Bejarano Valeria 201522083 MEDICINA Y CIRUGÍA (3660)
Noguera Peña Dayra Edith 201531012 MEDICINA Y CIRUGÍA (3660)
Profesor
ÁngelaEscudero
Diciembre 10 de 2015
INTRODUCCIÒN
La cinética enzimática es la parte de la Enzimología que se ocupa del estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas y las causas de su variación. Los ensayos enzimáticos se emplean rutinariamente en muchos laboratorios clínicos para el diagnóstico de numerosas enfermedades, bien observando velocidades de reacción anormales o bienobservando niveles enzimáticos inadecuados en el plasma u otros tejidos.
Un ensayo enzimático se basa en la actuación de la enzima sobre una sustancia, llamada sustrato, catalizando su conversión en otra específica, conocida como producto. Normalmente algún elemento de los que intervienen en la reacción absorbe luz a una longitud de onda determinada, con lo que la reacción puede seguirse porcolorimetría o espectrofotometría.
La fosfatasa alcalina (Ortofosfórico monoéster fosfohidrolasa, es una enzima ampliamente distribuida que hidroliza el enlace éster fosfórico entre un grupo fosfato y un radical orgánico a pH básico (pH óptimo entre 9 y 10) liberando fosfato inorgánico. Está presente en riñón, hígado, intestino y hueso. La medida de niveles anormales de fosfatasa alcalina en el suero indicanla existencia de enfermedades óseas degenerativas (raquitismo, osteomalacia, hiperparatiroidismo secundario, osteosarcoma) o bien daños hepáticos. El aumento fisiológico de los niveles plasmáticos de fosfatasa alcalina se produce en animales en fase de crecimiento (se está formando tejido óseo) o en hembras gestantes (fosfatasa alcalina de la placenta).
Esta enzima, también se utiliza comocontrol de la adecuada pasterización de la leche y crema, dado que la fosfatasa alcalina se inactiva por calentamiento.
En el ensayo enzimático se usó como sustrato de la fosfatasa alcalina un compuesto artificial: p-Nitrofenil-fosfato que, al poseer un resto orgánico con un grupo fosfato unido, puede ser reconocido por la enzima.
El sustrato al ser hidrolizado origina un producto, el p-Nitrofenol,compuesto coloreado que en solución alcalina absorbe a una longitud de onda de 405 nm, por lo que su aparición en el transcurso de la reacción (Figura 1) puede seguirse colorimétricamente.
Para detener la reacción se añadirá fosfato, ya que el exceso de este producto de la reacción inhibe la actividad enzimática.
Figura 1. Reacción enzimática de la fosfatasa alcalina y el p-Nitrofenil-fosfato
Elp-Nitrofenol, que al ser indicador de pH manifiesta su color únicamente a pH alcalino, absorbe luz en la zona visible del espectro a longitudes de onda entre 400 y 420 nm. Por tanto, la reacción consiste en medir la absorbancia a estas longitudes de onda en función del tiempo. El incremento en la absorbancia, que debe ser lineal por unidad de tiempo, es una medida de la actividad del enzima.[1]OBJETIVOS
Conocer y adquirir experiencia en el manejo de los instrumentos necesarios para la practica de espectrofotometría.
Utiliza la ley de Beer Lambert para establecer la concentración de una muestra realizando una curva de calibración.
Determinar el efecto sobre la actividad enzimática de la variación del tiempo pH, temperatura, en la enzima fosfatasa utilizando el sustrato sintéticop-nitro-fenilfosfato. (PNFP)
PROCEDIMIENTO
Curva de calibración de p-nitrofenol : Utilizando una longitud de onda de 405 nm determine la relación entre absorbancia y concentración y transmitancia y concentración.
Tome 5 tubos de ensayo y márquelos con cinta de enmascarar y agregue a cada uno las soluciones de la tabla 1.
Leer la serie de muestras en el colorímetro contra el blanco, anote sus...
Enzimología I
Estudiantes
Martínez Ospina Jefrey Steven 201523052 MEDICINA Y CIRUGÍA (3660)
Motta Martínez María Isabel 201528449 MEDICINA Y CIRUGÍA (3660)
Muriel Bejarano Valeria 201522083 MEDICINA Y CIRUGÍA (3660)
Noguera Peña Dayra Edith 201531012 MEDICINA Y CIRUGÍA (3660)
Profesor
ÁngelaEscudero
Diciembre 10 de 2015
INTRODUCCIÒN
La cinética enzimática es la parte de la Enzimología que se ocupa del estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas y las causas de su variación. Los ensayos enzimáticos se emplean rutinariamente en muchos laboratorios clínicos para el diagnóstico de numerosas enfermedades, bien observando velocidades de reacción anormales o bienobservando niveles enzimáticos inadecuados en el plasma u otros tejidos.
Un ensayo enzimático se basa en la actuación de la enzima sobre una sustancia, llamada sustrato, catalizando su conversión en otra específica, conocida como producto. Normalmente algún elemento de los que intervienen en la reacción absorbe luz a una longitud de onda determinada, con lo que la reacción puede seguirse porcolorimetría o espectrofotometría.
La fosfatasa alcalina (Ortofosfórico monoéster fosfohidrolasa, es una enzima ampliamente distribuida que hidroliza el enlace éster fosfórico entre un grupo fosfato y un radical orgánico a pH básico (pH óptimo entre 9 y 10) liberando fosfato inorgánico. Está presente en riñón, hígado, intestino y hueso. La medida de niveles anormales de fosfatasa alcalina en el suero indicanla existencia de enfermedades óseas degenerativas (raquitismo, osteomalacia, hiperparatiroidismo secundario, osteosarcoma) o bien daños hepáticos. El aumento fisiológico de los niveles plasmáticos de fosfatasa alcalina se produce en animales en fase de crecimiento (se está formando tejido óseo) o en hembras gestantes (fosfatasa alcalina de la placenta).
Esta enzima, también se utiliza comocontrol de la adecuada pasterización de la leche y crema, dado que la fosfatasa alcalina se inactiva por calentamiento.
En el ensayo enzimático se usó como sustrato de la fosfatasa alcalina un compuesto artificial: p-Nitrofenil-fosfato que, al poseer un resto orgánico con un grupo fosfato unido, puede ser reconocido por la enzima.
El sustrato al ser hidrolizado origina un producto, el p-Nitrofenol,compuesto coloreado que en solución alcalina absorbe a una longitud de onda de 405 nm, por lo que su aparición en el transcurso de la reacción (Figura 1) puede seguirse colorimétricamente.
Para detener la reacción se añadirá fosfato, ya que el exceso de este producto de la reacción inhibe la actividad enzimática.
Figura 1. Reacción enzimática de la fosfatasa alcalina y el p-Nitrofenil-fosfato
Elp-Nitrofenol, que al ser indicador de pH manifiesta su color únicamente a pH alcalino, absorbe luz en la zona visible del espectro a longitudes de onda entre 400 y 420 nm. Por tanto, la reacción consiste en medir la absorbancia a estas longitudes de onda en función del tiempo. El incremento en la absorbancia, que debe ser lineal por unidad de tiempo, es una medida de la actividad del enzima.[1]OBJETIVOS
Conocer y adquirir experiencia en el manejo de los instrumentos necesarios para la practica de espectrofotometría.
Utiliza la ley de Beer Lambert para establecer la concentración de una muestra realizando una curva de calibración.
Determinar el efecto sobre la actividad enzimática de la variación del tiempo pH, temperatura, en la enzima fosfatasa utilizando el sustrato sintéticop-nitro-fenilfosfato. (PNFP)
PROCEDIMIENTO
Curva de calibración de p-nitrofenol : Utilizando una longitud de onda de 405 nm determine la relación entre absorbancia y concentración y transmitancia y concentración.
Tome 5 tubos de ensayo y márquelos con cinta de enmascarar y agregue a cada uno las soluciones de la tabla 1.
Leer la serie de muestras en el colorímetro contra el blanco, anote sus...
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