metodo de bradford

DETERMINACION DE PROTEINAS: METODO DE BRADFORD
INTRODUCCION
Existen varios métodos para determinar la concentración de proteínas
de una muestra, tales como la determinación de la absorbancia a 280nm, o
mediante la formación de derivados coloreados de las proteínas, base de los
métodos de BIURET o de LOWRY. En estos casos se forma un complejo
coloreado de cobre con el enlace peptídico; enel método de Lowry, además
del complejo anterior también se forma un derivado de las tirosinas que
contribuye a la absorbancia total.

El método que vamos a utilizar durante estas prácticas se basaen un
principio diferente: se emplea un colorante hidrofóbico cuyas disoluciones
acuosas en presencia de ac. fosfórico tienen un color pardo y que, al
encontrarse en el entorno hidrofóbico delinterior de una proteína, origina
un color azul intenso que se puede medir fácilmente. Este método depende,
pues de la interacción relativamente inespecífica entre un colorante
hidrofóbico y lasproteínas, por lo que es relativamente sensible a la
presencia de contaminantes tales como restos de detergente y líquidos
orgánicos como el metanol. Su principal ventaja es que resulta más rápido
yfácil de emplear que otros métodos alternativos, y más sensible que la
medida de absorbancia a 280 nm.
Para determinar la concentración de proteína total presente en una
muestra se requiere lapreparación de una curva de calibrado empleando
una proteína patrón, que generalmente suele ser la seroalbúmina bovina.

OBJETIVO
Determinar la concentración de proteínas de leche de vaca desnatada.MATERIAL
1- Reactivo de Bradford (“Muy importante”. No confundir el coomasie G250 con el coomasie R-250).
Azul de coomasie G-250
Etanol
Ac. fosfórico
agua

5 mg
2.5 ml
5 ml
Hasta 50 ml

Mezclaren el orden indicado, disolver con agitación y a continuación
filtrar.
2- Patrón de albúmina. Disolver 10 mg de albúmina bovina en 10 ml de
agua destilada, con lo que tenemos una disolución...