Metodo De Calibracion

MÉTODOS DE CALIBRACIÓN.

Todos los métodos analíticos (instrumentales) requieren una calibración previa a la determinación de la concentración de la sustancia en la muestra problema, siendo dicha calibración un proceso que relaciona la señal analítica medida con la concentración del analito.
La Ley de Beer tiene como aplicación práctica, la determinación de la concentración de una sustancia enuna solución problema por comparación con una o más soluciones de la misma naturaleza de concentración conocida, basándose en la relación lineal existente entre absorbancia y concentración.
La curva de calibración relaciona las absorbancias con las concentraciones, y se elabora realizando con un instrumento, lecturas a una determinada longitud de onda, de patrones (estándar) que poseendiferentes concentraciones (exactamente conocidas) del analito que se quiere dosificar o cuantificar. A través de la representación gráfica por interpolación de la absorbancia de la solución problema, se determina la concentración de ésta.
Para construir la curva de calibración se deben utilizar “patrones de trabajo” con concentraciones que cubran el rango de valores que en la práctica puedan encontrarseclínicamente en la sangre del paciente, es decir, que sean equivalentes.
Una vez obtenidas las lecturas, se realiza la representación gráfica de las absorbancias de los patrones en función de la concentración, se debe emplear un mínimo de tres puntos y trazar una línea recta que se aproxime a ellos lo más posible, generalmente a una concentración de cero corresponde una absorbancia de cero, lasunidades de concentración empleadas en la curva deben ser las mismas que se vayan a utilizar para expresar los resultados.
En las determinaciones fotométricas se debe conocer la linearidad, en otras palabras, conocer las concentraciones del analito entre las cuales existe una relación lineal entre concentración y absorbancia, es decir, se cumple la Ley de Beer. La lectura de una absorbancia fuerade los límites de linearidad, se traduce en una concentración falsamente baja de la sustancia en estudio, ante esta situación hay que diluir la muestra, para que la concentración se ubique dentro de los límites de linearidad y luego se multiplicaría por el factor de dilución.

Fig. 1. Curva de calibrado

Ax y C/mg.dL-1

Intervalo x – y: Límites de linearidad: Intervalo de concentraciones entre las cuales es lineal (se cumple la Ley de Beer) la relación entre absorción y concentración. Concentraciones superiores al valor “y” no pueden ser medidas en virtud del no cumplimiento de la relación proporcional entre Absorbancia y Concentración: las muestras cuyasconcentraciones superen dicho valor, deben ser diluidas para que pueda realizarse la determinación, y el valor obtenido debe ser multiplicado por el factor de dilución.


Otro método empleado para la determinación de la concentración de una sustancia en una muestra problema son los Factores de Calibración, que consisten en calcular el cociente de la concentración de cada patrón con su absorbancia(determinada experimentalmente), el resultado será el factor, que será constante y que al multiplicarse por la absorbancia de la muestra problema proporcionará la concentración de dicha muestra, es decir, se establece por relación matemática.






Concentración del problema = FACTOR x absorbancia del problema


El factor de calibración promedio, como su nombre lo indica, consiste en promediarlos factores de varios patrones con diferentes concentraciones para así obtener un solo factor que permita conocer la concentración de la muestra problema con mayor exactitud. Para reactivos estables y sistemas fotométricos estables, este factor se puede mantener constante, siendo solo necesario determinar la absorbancia de las soluciones problemas para luego multiplicarlas por el factor, para...