Metodo Electroforesis

ELECTROFORESIS DE ADN EN GELES DE POLIACRILAMIDA
5.5.2 Materiales
5.5.2.1 Cámara de electroforesis incluyendo gel preparado.
5.5.2.2 Fuente de poder.
5.5.2.3 Buffer de solución stock ADN TAE 50X(Anexo A).
5.5.2.4 Buffer de la muestra para ADN (Anexo A).
5.5.2.5 Guantes.
5.5.2.6 Gradilla para tubos de 1,5 mL
5.5.2.7 Micropipetas para volúmenes de 20 L.
5.5.2.8 Puntas para micropipeta de20 L.
5.5.2.9 Envase para descarte de puntas.
5.5.2.10 Lámina extensible de parafina.
5.5.3 Principio del procedimiento
En el proceso de la electroforesis se realizará la separación de lasmoléculas de ADN a analizar de
acuerdo a su peso molecular. Dicha distribución dependerá de la concentración del gel de resolución
que se esté trabajando.
5.5.4 Procedimiento
5.5.4.1 Asegurarse de usarguantes durante la manipulación de las soluciones, las muestras y el equipo.
5.5.4.2 Mezclar cinco volúmenes de solución conteniendo ADN con un volumen del buffer de muestra 6X.
Para realizar lamezcla, añadir 1 volúmen de buffer de muestra, repartidos en alícuotas de acuerdo al
número de muestras a cargar, sobre un pedazo de lámina extensible de parafina.
Añadir cinco volúmenes de cada una delas muestras de ADN sobre las alícuotas de buffer de la
muestra y mezclar totalmente.
5.5.4.3 Mediante el uso de puntas de 20 L proceder a cargar cuidadosamente la muestra en los pocillos,evitando la contaminación del pocillo contiguo (Figuras N13 y 14).
5.5.4.4 Considerar el uso de un marcador estándar de ADN para la medición del peso molecular de la muestra.
Dicho marcador también debeser mezclado con buffer de la muestra excepto cuando ya se encuentra
previamente mezclado con el buffer.
Una vez finalizada la colocación del ADN en los pocillos, cubrir el tanque con la tapa yconectar los
cables correspondientes de los electrodos en la fuente de poder.
5.5.4.6 Encender la fuente de poder y proceder a seleccionar el voltaje adecuado.
5.5.4.7 Aplicar un voltaje de acuerdo...