metodo fenol-sulfurico

Materiales y equipo.
-Tubos de ensayo
-Embudo de vidrio
-Papel filtro
-Pipetas volumétricas
-Pipetas mohr-Agitador
-Gradilla
-Centrifugadora
-Baño de hielo-Espectrofotómetro UV-Visible
Reactivos.
-Solución de sulfato de Zinc 10%
-Solución de NaOH 0.5 N
-Solución de fenol 5%
-Acido Sulfúrico concentrado
-Solución patrón de carbohidratoProcedimiento.
Desproteinización de las muestras.
-Pesar 2 g de muestra homogenizada y suspender en 20 mL agua desmineralizada. Homogenizar.
-Filtrar y tomar 10 mL del filtrado, a esteadicionar 1 mL de una solución de Sulfato de Zinc al 10% y 1 mL de NaOH 0.5 N.
-Mantener en reposos durante 15 minutos y luego centrifugar a 200 rpm durante 15 minutos. Utilizarel sobrenadante para la cuantificación de azucares totales.
Determinación de Azucares Totales
NOTA. Realizar todo el procedimiento para un tubo antes de seguir con el siguiente.-Preparar una solución o suspensión de la muestra en agua, procurando que los carbohidratos se encuentren en el intervalo de sensibilidad del método (10-100μg/mL).
-En tubos deensayo perfectamente etiquetados, colocar 1 mL de la solución o suspensión acuosa de la muestra.
-Para cada tubo adicionar 0.6 mL de una solución acuosa de fenol al 5%. Mezclandoperfectamente.
-Adicionar cuidadosamente 3.6 mL de ácido sulfúrico concentrado, homogeneizar.
-Dejar enfriar la mezcla a temperatura ambiente (aproximadamente 30 min.).
-Determinar laintensidad del color naranja obtenido en un espectrofotómetro a 490 nm, frente a un blanco preparado de la misma manera utilizando agua desmineralizada.
-Calcular la cantidad decarbohidratos presentes en la muestra a partir de una curva patrón preparada con el carbohidrato de interés en el intervalo del método, tratada de la misma manera que el problema.