Metodos Bioquimicos

PRACTICA 7
Pruebas de diferenciación bioquímica

Introducción.
El metabolismo es toda una serie de reacciones que ocurren en los seres vivos. Estas reacciones incluyen procesos de obtención de energía como son: la composición de moléculas orgánicas en los quimiótrofos (catabolismo) o la captación de luz para el caso de los fotótrofos, así como de síntesis de material celular a partir denutrientes esenciales (anabolismo).
En el laboratorio es posible conocer las características metabólicas de los microorganismos, inoculando en diferentes medios de cultivo, con sustratos que pueden utilizar como fuente de energía, fuente de carbono y de otros nutrientes esenciales para su crecimiento.
Como se ha observado en prácticas anteriores, algunas bacterias y levaduras tienencaracterísticas coloniales y microscópicas muy similares, lo que no permiten decidir si dos cultivos bacterianos o de levaduras morfológicamente similares pertenecen a una misma especie. Con algunas pruebas bioquímicas es posible su diferenciación e incluso su identificación. Cuando el número de pruebas es suficientemente amplio.


Objetivos.
▪ Realizar pruebas bioquímicas en medios de cultivo parasustratos específicos que permitirán demostrar actividades metabólicas de bacterias y levaduras.
▪ Comprender la importancia de las pruebas bioquímicas para caracterización e identificación de estos organismos.




|Materiales de laboratorio por equipo |Material del Equipo |
|3Tubos con TSI (pico de flauta)|Cinta adhesiva transparente |
|3Tubos con MIO |Cerillos |
|3Tubos con citratos de Simmons (pico de Flauta) |Franela |
|3Tubos con agar urea (picode flauta) |marcador indeleble o lápiz graso |
|3Cajas de Petri con AA |Cloro |
|1 Asas bacteriológicas de punta y aro |Colores |
|2 mecheros| |



Actividad práctica.

Técnica de inoculación en cajas de Petri
1. Sembrar por estría cruzada
2. Incubar las cajas en forma invertida a 35 (C durante 24-48 hrs.

Técnica de inoculación
1. Los tubos de TSI se inocularan por estría simple en la superficie y porpicadura hasta el fondo del tubo.
2. Los tubos con medio MIO se inocularan por picadura (asa recta)
3. Los tubos con citrato de Simmons se inocularán por estría simple en la superficie.
4. los tubos de caldo de urea se inocularan 2 a 3 veces.
5. Incubar los tubos a 35 (C durante 24-48 hrs.








Evaluación de actividades metabólicas
1. Determinar la actividad deamilasas en las cajas de AA por el crecimiento y aparición de zonas claras alrededor de las colonias. Si no es posible observarlas a simple vista, agregar unas gotas de lugol a las cajas y observar la aparición de zonas claras sobre el medio que se colorea de azul como indicativo de prueba positiva (+). Comparar los resultados con la zona de la caja que se dejo sin inocular.
2. En un portaobjetohacer una suspensión en una gota de agua destilada de las colonias obtenidas en el medio AA y agregar unas gotas de peroxido de hidrógeno al 30%. Observar la formación de burbujas que da como positiva (+) la prueba de catalasa.
3. En los tubo con MIO es usado para la identificación de Enterobacteriaceae en base a su movilidad, actividad de ornitina decarboxilasa y producción de indol....