Microarrays De Adn
Páginas: 5 (1017 palabras)
Publicado: 21 de septiembre de 2011
PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CHILE
Microarrays de ADN
Introducción.
Antiguamente se utilizaban varios procedimientos para la secuenciación de ADN, algunos de los clásicos por ejemplo corresponden a los métodos de “marcado” y “separación” pero gracias a la “biología computacional” y a su avance a través del tiempo se ha llegado a desarrollar un método más efectivo que es el delos microarrays, a continuación desarrollaremos este último y explicaremos en que consiste, de qué forma se emplea, cuales son los instrumentos que se usan, las diferentes técnicas que se desarrollan dentro de él, y también las diversas aplicaciones que tiene este en la vida sobre todo en el ámbito de la salud.
ADN Microarrays.
“Los microarrays de ADN se definen como una matrizbidimensional de material genético, que permite la automatización simultánea de miles de ensayos encaminados a conocer en profundidad la estructura y funcionamiento de nuestra dotación genética, tanto en los distintos estados de desarrollo como patológicos del paciente” (1)
La matriz bidimensional de los microarrays de ADN se forma a partir de un gran número de moléculas de ADN ordenadas sobreun sustrato sólido. Estos sustratos sólidos se clasifican en porosos, dentro de los cuales los más utilizados son membrana de Nylon, membrana de Nitrocelulosa, y micropartículas, mientras que dentro de la clasificación de no porosos se utiliza cristal/cuarzo y plástico.
Los fragmentos de material genético pueden ser secuencias cortas denominadas oligonucleótidos o secuencias de mayortamaño de ADN complementario (sintetizado a partir de ARN mensajero) o también el material genético puede ser producto de PCR (replicación in vitro de secuencias de ADN mediante la reacción en cadena de la polimerasa).
Existen dos técnicas para inmovilizar los fragmentos de ADN en el soporte, esto a través de la síntesis de los oligonucleótidos en el propio soporte mediante ciclos sucesivoso también a través de un brazo robotizado que deposita el fragmento presintetizado que corresponda.
A estos fragmentos de ADN de una sola hebra inmovilizados en el soporte se les denomina sondas.
Existen tres tipos de sondas que pueden ser utilizadas para el diseño de microarrays: dos sondas genómicas (una puede detectar pérdida o ganancia de genes, mientras que la otra puede detectar mutacionesen el ADN) y un tipo de sonda transcriptómica (que mide los niveles de ARNm). Estas sondas se diferencian unas de otras por el tipo de ADN que se inmovilizó en el soporte.
Los ácidos nucleicos de las muestras a analizar se marcan por diferentes métodos (fluorescentes, enzimáticos, etc.) y se incuban sobre el panel de sondas, asi permite la hibridación de secuencias homólogas, es decir,el reconocimiento y unión entre moléculas complementarias. Las muestras de material genético marcadas, durante la hibridación se unirán a sus complementarias inmovilizadas en el soporte, de esta manera se puede llevar a cabo la identificación y cuantificación del ADN presente en la muestra (patógenos, mutaciones, etc.). Una vez obtenidos los datos, se interpretan mediante escáner y herramientasinformáticas.
En medicina, la técnica de hibridación con microarrays puede emplearse para fines tales como: clasificación de una enfermedad en función de su perfil de expresión específico; determinar qué genes, y por tanto, qué proteínas, están implicadas en la aparición y desarrollo de una enfermedad, mediante la comparación del perfil de individuos sanos e individuos enfermos; ydeterminar qué cambios provoca en el perfil de expresión génica asociado a una enfermedad un cambio en la dosis de un fármaco, entre otros.
Algunas de las aplicaciones de los microarrays en el sector de la salud humana son: caracterización del ADN mediante una secuenciación por hibridación, lo que permite detectar mutaciones y variaciones en el genoma; cuantificación del ADN mediante el...
Microarrays de ADN
Introducción.
Antiguamente se utilizaban varios procedimientos para la secuenciación de ADN, algunos de los clásicos por ejemplo corresponden a los métodos de “marcado” y “separación” pero gracias a la “biología computacional” y a su avance a través del tiempo se ha llegado a desarrollar un método más efectivo que es el delos microarrays, a continuación desarrollaremos este último y explicaremos en que consiste, de qué forma se emplea, cuales son los instrumentos que se usan, las diferentes técnicas que se desarrollan dentro de él, y también las diversas aplicaciones que tiene este en la vida sobre todo en el ámbito de la salud.
ADN Microarrays.
“Los microarrays de ADN se definen como una matrizbidimensional de material genético, que permite la automatización simultánea de miles de ensayos encaminados a conocer en profundidad la estructura y funcionamiento de nuestra dotación genética, tanto en los distintos estados de desarrollo como patológicos del paciente” (1)
La matriz bidimensional de los microarrays de ADN se forma a partir de un gran número de moléculas de ADN ordenadas sobreun sustrato sólido. Estos sustratos sólidos se clasifican en porosos, dentro de los cuales los más utilizados son membrana de Nylon, membrana de Nitrocelulosa, y micropartículas, mientras que dentro de la clasificación de no porosos se utiliza cristal/cuarzo y plástico.
Los fragmentos de material genético pueden ser secuencias cortas denominadas oligonucleótidos o secuencias de mayortamaño de ADN complementario (sintetizado a partir de ARN mensajero) o también el material genético puede ser producto de PCR (replicación in vitro de secuencias de ADN mediante la reacción en cadena de la polimerasa).
Existen dos técnicas para inmovilizar los fragmentos de ADN en el soporte, esto a través de la síntesis de los oligonucleótidos en el propio soporte mediante ciclos sucesivoso también a través de un brazo robotizado que deposita el fragmento presintetizado que corresponda.
A estos fragmentos de ADN de una sola hebra inmovilizados en el soporte se les denomina sondas.
Existen tres tipos de sondas que pueden ser utilizadas para el diseño de microarrays: dos sondas genómicas (una puede detectar pérdida o ganancia de genes, mientras que la otra puede detectar mutacionesen el ADN) y un tipo de sonda transcriptómica (que mide los niveles de ARNm). Estas sondas se diferencian unas de otras por el tipo de ADN que se inmovilizó en el soporte.
Los ácidos nucleicos de las muestras a analizar se marcan por diferentes métodos (fluorescentes, enzimáticos, etc.) y se incuban sobre el panel de sondas, asi permite la hibridación de secuencias homólogas, es decir,el reconocimiento y unión entre moléculas complementarias. Las muestras de material genético marcadas, durante la hibridación se unirán a sus complementarias inmovilizadas en el soporte, de esta manera se puede llevar a cabo la identificación y cuantificación del ADN presente en la muestra (patógenos, mutaciones, etc.). Una vez obtenidos los datos, se interpretan mediante escáner y herramientasinformáticas.
En medicina, la técnica de hibridación con microarrays puede emplearse para fines tales como: clasificación de una enfermedad en función de su perfil de expresión específico; determinar qué genes, y por tanto, qué proteínas, están implicadas en la aparición y desarrollo de una enfermedad, mediante la comparación del perfil de individuos sanos e individuos enfermos; ydeterminar qué cambios provoca en el perfil de expresión génica asociado a una enfermedad un cambio en la dosis de un fármaco, entre otros.
Algunas de las aplicaciones de los microarrays en el sector de la salud humana son: caracterización del ADN mediante una secuenciación por hibridación, lo que permite detectar mutaciones y variaciones en el genoma; cuantificación del ADN mediante el...
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