Microbiologia
Páginas: 16 (3770 palabras)
Publicado: 23 de junio de 2011
Laboratorio de Microbiología General
EQUIPO #13
REPORTE PRÁCTICA #5
TINCIONES DIFERENCIALES
OBSERVACIONES
PREPARACIÓN DE UN FROTE
Antes de iniciar la preparación de una técnica de tinción es importante que se realice un frote, ya que será la base para nuestra muestra, se realiza de la siguiente manera:
1. Se toma un portaobjetos limpio y se le coloca una gota de agua (entremás pequeña mejor ya que secara mas rápido)
2. Posteriormente se toma con asa microbiológica previamente esterilizada una pequeña muestra de algún cultivo.
3. Se frota sobre la superficie donde se coloco la gota de agua para que se disperse la muestra.
4. Fijar el frotis por medio del mechero, cuidando de no sobrecalentar el frotis, y dejar enfriar.
NOTA: la fijación delfrotis no se realiza en la tinción de capsula Método de Rojo Congo, en las demás tinciones.
También es muy importante mencionar que no se debe sobrecalentarse el frotis ya que el calor exesivo puede llegar a matar al microorganismo,debe ser a una temperatura que no moleste al tacto.
En algunas de las tinciones llevadas a cabo en el laboratorio se tuvo que realizar un frotis previo que es laextensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo (se toma una muestra mínima) con el objetivo de separar lo mejor posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen en el microscopio clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinciónque permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados.
METODOS DE TINCIONES
* Método de Gram
Se utilizaron los microorganismos: Escherichia coli y Staphylococcus aureus, y con ambos se realizo un frote y se siguió la siguiente secuencia de colorantes:
Cabe mencionar que en el cambio de colorante se debe dejaractuar durante 1 min, enjuagar con agua destilada y dejar secar antes de aplicar el siguiente colorante al final se observa al microscopio.
* Método de Ziehl-Neelsen
Se utilizo el microorganismo Mycobacterium tuberculosis y se realiza un frote y se sigue la siguiente secuencia de colorantes:
En el momento en el que se calienta el colorante se debe cuidar que este no hierva y se debe demantener por lo menos 5 min, en cada cambio de colorante enguagar con agua destilada y dejar secar.
* Método de Rojo Congo
Se utilizo el microorganismo Bacillus subtilis y se realizo un frote pero esta vez NO SE FIJA con calor y en lugar de usar la gota de agua se utiliza la gota de colorante esta se deja secar y se le agrega el MORDENTE para cápsula y deja actuar por 1 min,se lava conagua destilada y se deja secar.
* Método de Sheaffer-Fulton
Se utilizo el microorganismo Bacillus subtillis y se realizo un frote y se sigue la siguiente secuencia de colorantes:
En el momento en el que se calienta el colorante se debe cuidar que este no hierva y se debe de mantener por lo menos 5 min, en cada cambio de colorante enguagar con agua destilada y dejar secar.
*Método de Tinción Simple
Este es el método más sencillo para realizar una tinción únicamente se utiliza el microorganismo Bacillus subtillis, se realiza un frote, se cubre con cristal violeta, se enguaga y se observa.
* Método de Knaysi
Se utilizo el microorganismo Bacillus subtillis se realizo un frote y se usa un mordente y un colorante.
En algunas ocasiones en las tinciones se agregauna sustancia química antes de aplicar el colorante para que intensifique la coloración de éste y principalmente para aumentar la afinidad de una muestra biológica por un colorante; otra es cubrir una estructura (como un flagelo) para darle mayor espesor y facilitar la observación después del teñido.
RESULTADOS
A continuacion se muestran los dibujos de los microorganismos que se lograron...
EQUIPO #13
REPORTE PRÁCTICA #5
TINCIONES DIFERENCIALES
OBSERVACIONES
PREPARACIÓN DE UN FROTE
Antes de iniciar la preparación de una técnica de tinción es importante que se realice un frote, ya que será la base para nuestra muestra, se realiza de la siguiente manera:
1. Se toma un portaobjetos limpio y se le coloca una gota de agua (entremás pequeña mejor ya que secara mas rápido)
2. Posteriormente se toma con asa microbiológica previamente esterilizada una pequeña muestra de algún cultivo.
3. Se frota sobre la superficie donde se coloco la gota de agua para que se disperse la muestra.
4. Fijar el frotis por medio del mechero, cuidando de no sobrecalentar el frotis, y dejar enfriar.
NOTA: la fijación delfrotis no se realiza en la tinción de capsula Método de Rojo Congo, en las demás tinciones.
También es muy importante mencionar que no se debe sobrecalentarse el frotis ya que el calor exesivo puede llegar a matar al microorganismo,debe ser a una temperatura que no moleste al tacto.
En algunas de las tinciones llevadas a cabo en el laboratorio se tuvo que realizar un frotis previo que es laextensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo (se toma una muestra mínima) con el objetivo de separar lo mejor posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen en el microscopio clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinciónque permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados.
METODOS DE TINCIONES
* Método de Gram
Se utilizaron los microorganismos: Escherichia coli y Staphylococcus aureus, y con ambos se realizo un frote y se siguió la siguiente secuencia de colorantes:
Cabe mencionar que en el cambio de colorante se debe dejaractuar durante 1 min, enjuagar con agua destilada y dejar secar antes de aplicar el siguiente colorante al final se observa al microscopio.
* Método de Ziehl-Neelsen
Se utilizo el microorganismo Mycobacterium tuberculosis y se realiza un frote y se sigue la siguiente secuencia de colorantes:
En el momento en el que se calienta el colorante se debe cuidar que este no hierva y se debe demantener por lo menos 5 min, en cada cambio de colorante enguagar con agua destilada y dejar secar.
* Método de Rojo Congo
Se utilizo el microorganismo Bacillus subtilis y se realizo un frote pero esta vez NO SE FIJA con calor y en lugar de usar la gota de agua se utiliza la gota de colorante esta se deja secar y se le agrega el MORDENTE para cápsula y deja actuar por 1 min,se lava conagua destilada y se deja secar.
* Método de Sheaffer-Fulton
Se utilizo el microorganismo Bacillus subtillis y se realizo un frote y se sigue la siguiente secuencia de colorantes:
En el momento en el que se calienta el colorante se debe cuidar que este no hierva y se debe de mantener por lo menos 5 min, en cada cambio de colorante enguagar con agua destilada y dejar secar.
*Método de Tinción Simple
Este es el método más sencillo para realizar una tinción únicamente se utiliza el microorganismo Bacillus subtillis, se realiza un frote, se cubre con cristal violeta, se enguaga y se observa.
* Método de Knaysi
Se utilizo el microorganismo Bacillus subtillis se realizo un frote y se usa un mordente y un colorante.
En algunas ocasiones en las tinciones se agregauna sustancia química antes de aplicar el colorante para que intensifique la coloración de éste y principalmente para aumentar la afinidad de una muestra biológica por un colorante; otra es cubrir una estructura (como un flagelo) para darle mayor espesor y facilitar la observación después del teñido.
RESULTADOS
A continuacion se muestran los dibujos de los microorganismos que se lograron...
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