Microbiologia

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Pipetas graduadas estériles de 10 mL con tapón de algodón a.
Pipetas Pasteur estériles a, b
Propipetaa, b
Cajas de Petri estériles (una se utiliza para pesar la muestra) a.
Utensilios estériles para la manipulación de muestras: cuchillos, cucharas,
tenedores, etc. a
Incubadora con termostato que pueda ser mantenido a 25±1° a.
C
Baño de agua con controlde temperatura y circulación mecánica mantenida a
45±1° a.
C
Portaobjetos, cubreobjetos, diurex b.
Microscopio óptico b.
Asa bacteriológica y asa micológicab.
Contador de colonias de campo oscuro, con luz adecuada, placa de cristal
cuadriculada y lente amplificador b.

NOTAS
a
b

Material necesario para el inicio de la práctica.
Material necesario para los 3, 4 y/o 5 días después deiniciada la práctica.

Versión para Administrador de Manuales y Documentos (AMyD). Facultad de Química, UNAM

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Camacho, A., M.Giles, A.Ortegón, M.Palao, B.Serrano y O.Velázquez. 2009. Técnicas para el Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed.
Facultad de Química, UNAM. México.

DETERMINACION DE MOHOS Y LEVADURAS EN ALIMENTOS

Realizar diluciones decimales empleando tubos con 9.0ml de solución diluyente

1.0 mL

Homogenizar
con 90 .0 mL de
solución

Pesar 10 g de
muestra en
condiciones
de asepsia

10-1

10-2

1.0 mL

10-3

10-4

Depositar por duplicado 1.0 mL de
cada dilución en cajas de Petri
estériles

Adicionar de 15 a 20 mL de agar
papa dextrosa y/ó agar extracto
de malta acidificados con 0.3
mL ácido tartárico 10 %
enfriado a 45° encada placa
C

Homogeneizar la
muestra con el agar
mediante
movimientos
rotatorios

1.0 mL

Incubar las cajas en
posición invertida

Contar aquellas placas que tengan
entre 10 a 150 colonias de hongos
y/o levaduras y reportar por
separado como UFC/g o mL de
muestra, indicando tiempo de
incubación

3,4 ó 5 días
/
28°
C
Versión para Administrador de Manuales y Documentos (AMyD).Facultad de Química, UNAM

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Camacho, A., M.Giles, A.Ortegón, M.Palao, B.Serrano y O.Velázquez. 2009. Técnicas para el
Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed. Facultad de Química, UNAM. México.

PROCEDIMIENTO
1. Pesar 10.0 g de muestra en una caja Petri estéril y pasarla a un matraz
Erlenmeyer que contenga 90.0 mL de una solución amortiguadora de
fosfatos de pH 7.2 ó aguapeptonada al 0.1%.
2. Homogeneizar la muestra con la solución anterior en un vaso de licuadora
estéril o pasarla a una bolsa de Stomacher y homogeneizar durante 10.0
seg en el caso de la licuadora a velocidad mínima, ó 30.0 seg en el
Stomacher a una velocidad normal. Esta es la dilución primaria.
3. De la suspensión o solución anterior, tomar 1.0 mL y transferirlo a un tubo
de ensayo que contenga9.0 mL de solución amortiguadora de fosfatos de
pH 7.2, agitar y repetir esta operación tantas veces como diluciones sean
necesarias. Se debe utilizar una pipeta estéril para cada dilución.
NOTA
Los microorganismos filamentosos forman las colonias a partir de una espora o
de un fragmento de hifa o de un cúmulo de hifas. Debido a esto, el número de
UFC/mL puede variar dependiendo de lascondiciones de homogeneización de
la muestra (a mayor tiempo de homogeneización mayor será la ruptura de las
hifas y por lo tanto se aumentarían las UFC / mL), por lo que se debe poner
especial cuidado en esta etapa. Los tiempos de homogeneización citados en
esta metodología son los recomendados en la Norma Oficial Mexicana para
este grupo microbiano.
4. Colocar por duplicado en cajas Petriestériles, 1.0 mL de cada una de las
diluciones de la muestra, utilizando una pipeta estéril.
5. Fundir el medio contenido en los tubos de 22 x 175 mm con 20.0 mL de
agar papa dextrosa y/o de agar extracto de malta estériles. Enfriarlos y
mantenerlos a ±45°
C.
6. Para lograr acidificar los medios a un pH de 3.5, adicionar por cada 100.0
mL de agar, 1.4 mL de ácido tartárico al 10% esterilizado...