Microdilucion en caldo de cim

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OBJETIVOS

Pruebas de la Cim

Al finalizar este capítulo el lector deberá ser capaz de: • Enumerar los pasos necesarios para realizar la prueba de la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) por microdilución en caldo. • Mencionar las variables que deben ser controladas cuando se realiza la prueba. • Identificar los problemas que podrían ocurrir si las variables de la prueba no son controladasadecuadamente. • Determinar el número de organismos viables en el inóculo para asegurar que el número correcto de organismos sea inoculado en cada fuente. • Interpretar con base en las recomendaciones del NCCLS resultados de la CIM de un organismo/agente antimicrobiano específico como susceptible, intermedio o resistente.

ALCANCE
Este capítulo repasa la prueba de referencia de microdilución encaldo de la CIM según se describe en el documento M7 del NCCLS. Otros métodos de la CIM no son discutidos en detalle pero pueden encontrarse en el documento M7 del NCCLS. Los sistemas comerciales para determinar la CIM no están contemplados en este manual.

ANTECEDENTES DE LA PRUEBA
La concentración inhibitoria mínima (CIM) de un agente antimicrobiano es la mínima concentración del agenteantimicrobiano que inhibe la multiplicación y producción de un crecimiento visible de una cepa bacteriana dada en el sistema de prueba. Determinamos la concentración en el laboratorio incubando una cantidad conocida de bacterias con diluciones definidas del agente antimicrobiano. Utilizando los criterios de interpretación del NCCLS los resultados son interpretados como susceptible, intermedio oresistente. Las pruebas de la CIM pueden ser realizadas usando como medios de cultivo en caldo o agar, pero la microdilución en caldo es el método más utilizado en los laboratorios clínicos. Varias compañías fabrican paneles de CIM que contienen diluciones de uno o múltiples agentes antimicrobianos en un formato de microdilución en caldo. En los Estado Unidos, previo al uso de un producto comercial paraaislamientos clínicos, este debe ser aprobado por la FDA (Administración de Alimentos y Medicamentos) 53

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Metodos de Prueba Cada prueba comercial tiene procedimientos con pasos únicos. Por ejemplo, el procedimiento de preparación del inóculo varía considerablemente de método a método. La confiabilidad de cualquier prueba de susceptibilidad para detectar bacterias resistentes a losantimicrobianos depende del seguimiento preciso de las instrucciones.

MATERIALES Panel de Microdilución en Caldo de CIM
La prueba de microdilución en caldo de CIM se realiza en una placa de poli-estireno que contiene aproximadamente 96 celdillas. Una placa puede contener de 7 a 8 diluciones de 12 diferentes agentes antimicrobianos. Una celdilla sirve como control positivo (caldo más inóculo), y otrosirve como control negativo (sólo caldo). La mayoría de los sistemas tienen un volumen de 0.1 mL en cada celdilla. Para facilitar el uso de agentes antimicrobianos apropiados contra cepas específicas, un laboratorio por lo general tiene un tipo de placa para bacterias grampositivas y otro para bacterias gram-negativas. Para probar cepas aisladas de orina, algunos laboratorios tienen un tipodiferente de placa que contiene medicamentos apropiados para tratar infecciones de las vías urinarias bajas. Para probar bacterias fastidiosas se requieren paneles con medios especiales. El caldo Mueller-Hinton se recomienda como el medio preferido para pruebas de susceptibilidad de organismos comúnmente aislados, aeróbicos o facultativos de rápido crecimiento. El caldo debe tener el contenido apropiadode cationes suministrado por el fabricante (Ca++ y Mg++). Cada lote debe ser analizado con un medidor de pH después que el medio se haya preparado. El pH debe estar entre 7,2 y 7,4 a temperatura ambiente (25º C). Para organismos fastidiosos como Streptococcus pneumoniae el caldo Mueller-Hinton puede ser suplementado con 2-5% de sangre de caballo lisada. El desempeño de cada lote de caldo es...