Microinyección pronuclear

2 Microinyección pronuclear:
pequeñas cantidades del ADN de interés (transgen) eran inyectadas en el pronúcleo de un embrión al estado de dos células. Aunque ampliamente aceptada y utilizadaen forma rutinaria en muchos laboratorios, ha habido muy poco progreso para mejorar su eficiencia, la que se mantiene en el orden 0.1-5%, dependiendo de la especie considerada.
En la década del 80ocurrió un importante avance en la tecnología de animales transgénicos que marcó el curso de la investigación en este campo por al menos dos décadas. Gordon y colaboradores describieron una técnicadonde el ADN desnudo fue inyectado en el pronúcleo de un ovocito de ratón recientemente fertilizado, el que posteriormente se transfirió a hembras receptoras sincronizadas. Este experimento demostró queera posible usar un plásmido recombinante como vector para transferir genes foráneos directamente hacia el embrión. El ADN inyectado de esta forma se integró en el genoma y pudo ser heredado por ladescendencia de los animales transgénicos fundadores. La inyección de embriones al estado de una célula fue clave para obtener una integración temprana del transgen, permitiendo al ADN foráneocontribuir en el genoma de todas las células somáticas y la línea germinal.
Generación de los ratones transgénicos:
En una primera fase se aíslan un número grande de ovocitos fertilizados, los que seconsiguen sometiendo a la hembras a un tratamiento hormonal para provocar una mayor ovulación. En una segunda fase los ovocitos recién fertilizados se manipulan uno a uno, y con una micropipeta a modo deaguja se introduce una solución que contiene ADN. El ADN purificado es inyectado directamente en el pronucleo 11 masculino de un zigoto, utilizando para ello un micromanipulador acoplado a una pipeta conpresión negativa y otro manipulador a acoplado a una aguja de inyección
En la tercera fase estos óvulos son reimplantados en hembras que actuarán como nodrizas permitiendo el término de la...