Microorganismo
Shikonina
VENTAJAS DE PRODUCIR METABOLITOS IN VITRO
•Independencia de factores geográficos, estacionales y variaciones ambientales •Son sistemasde producción definida que aseguran un suministro contínuo y uniforme de producto en cuanto a calidad y rendimientos •Es posible producir compuestos nuevos no presentes en las plantas madreBiomass
0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0
0
3
7
11
15
18
22
25
29
32
Time (days)
Biomass (g dry wt/ batch 50 ml)
0,3
Evaluación de la acumulación de metabolitosMétodos de extracción
Medio Separación de la biomasa Biomasa • Secado o liofilizado • Extracción con solventes Extracciones líquido-líquido
Métodos de separación
Técnicas cromatográficas CC CCD HPLC GCEC
Evaluación de la acumulación de metabolitos Métodos de determinación estructural
Técnicas espectroscópicas
RMN UV IR
Polarimetría Técnicas espectrométricas EM
Métodos de análisiscuantitativo
HPLC (UV, IR, EM, etc) GC (EM, FID, etc) UV EC (EM, UV, Fluorométricos, etc) Métodos inmunológicos
Cinética de acumulación de metabolitos
Acumulación de metabolitos secundarios ydesarrollo de biomasa
Modelo de acumulación asociado al crecimiento
Artemisia douglasiana Besser
hojas
tallos
hip
Modelo de acumulación no asociado al crecimiento
Otros factoresque afectan la acumulación de metabolitos secundarios: concentración de fitorreguladores tamaño del inóculo
5,5 5
Grindelic acid mg/gDW
Grindelia pulchella
cells media
4,5 4 3,5 3 2 2,5 1,5 10,5 0 20/18 5% 20/18 10% 20/4.4 5%
20/4.4 10%
Fitorreguladores: IBA/BAP
Acido grindélico
Las líneas celulares pueden sufrir: • cambios genéticos (aberraciones cromosómicas,fragmentacione nucleares, endorreduplicaciones) La frecuencia de estas anormalidades incrementa con la edad de los cultivos (las células aneuploides y poliploides se dividen más rápido que las normales)...
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