molecular
Páginas: 9 (2244 palabras)
Publicado: 22 de marzo de 2013
EXTRACCIÓN ADN VEGETAL
BUFFER DE LISIS CON SDS.
INTRODUCCION
Una diferencia de este laboratorio es que utiliza para la purificación de ADN, varias rondas consecutivas con la acción de solventes orgánicos (como el cloroformo- alcohol Isoamilico) y sales como el Acetato de sodio. La precipitación se realiza con etanol absoluto y bajas temperaturas.
Ademas el aislamiento del ADN puede noser simple y los métodos no son necesariamente reproducibles para todas las especies. Las especies de las plantas pueden mostrar una gran variabilidad en complejas vías metabólicas, por lo que la composición bioquímica en los tejidos de diferentes especies puede variar considerablemente y no permitir producciones optimas de ADN a partir de un laboratorio, por lo que aun especies muy relacionadasrequieren diferentes protocolos de extracción.
OBJETIVOS:
Desarrollar habilidades en cada estudiante en el manejo de micropipetas y reactivos propios del laboratorio de biología molecular.
Analizar la calidad y cuantificar el ADN de las extracciones mediante la visualización de bandas en geles de agarosa y un marcador molecular.
MARCO TEORICO
METODOLOGIA:
Al iniciar ellaboratorio todos los estudiantes se colocaron los guantes de nitrilo, para luego tomar 200 mg de tejido fresco de la planta en tubos de 1.5 ml y lo marcamos con el sharpie, enseguida agregamos 40 ML de SDS y 20 ML de proteinasa, lo colocamos en baño de maría a 55°C durante 1 hora, luego agregamos 400 ML de fenol, de la fase de abajo del frasco, mesclamos y lo colocamos en la micro centrífuga durante 5minutos.
Recuperamos la fase superior y agregamos 400 ML de cloroformo_ alcohol Isoamilico. Lo mesclamos y centrifugamos durante 5 minutos, recuperamos la fase superior y agregamos 0.1 volúmenes de acetato de sodio 3 M y 2.5 volúmenes de etanol absoluto frio, mezclamos suavemente con pipeta y lo dejamos un día; luego se centrifugo durante 15 minutos y tiramos el sobrenadante, agregamos 400ml deetanol 70 % frio, lo centrifugamos durante 15 minutos, no agitamos, dejamos los tubos boca abajo y por ultimo agregamos 30 ML de buffer TE.
RESULTADOS
CONCLUSION.
Tener habilidad en el manejo de la micropipeta y los reactivos del laboratorio de biología molecular
Cuantificar y analizar la calidad del ADN mediante la visualización de bandas en geles.
Aprender a extraer ADN deforma adecuada siguiendo el protocolo de extracción.
INFOGRAFIA.
EXTRACCION DE ADN FUNGICO
INTRODUCCION
La extracción y purificación de ácidos nucleicos es el paso más importante en estudios de biología molecular y de las técnicas de ADN recombinante. El objetivo de la extracción de ácidos nucleicos es obtenerlos purificados de varias fuentes con elpropósito de conducir a un análisis más específico. La calidad y purificación de ácidos nucleicos es uno de los factores críticos del análisis de PCR. Con el propósito de obtener ácidos nucleicos más puros y libres de contaminantes, se deben utilizar métodos de extracción específicos. Los posibles contaminantes en el ADN que pueden inhibir la reacción de PCR son: SDS, fenol, etanol, isopropanol,acetato de sodio, cloruro de sodio, EDTA, heparina, urea.
MARCO TEORICO.
Muchos estudios han descrito diferentes métodos para la extracción de ADN de buena calidad, tanto en materias primas como productos altamente procesados. Tengel y col. (2001) utilizaron 2 métodos para aislar ADN de diferentes productos, con la finalidad de determinar el mejor método para obtener la máxima calidad,cantidad y pureza de ADN. Mediante el método DNeasy Plant Mini kit se logró aislar ADN de productos con poco procesamiento como son: harina de maíz y soya, proteína de soya y pan de maíz. Mientras que el QIAamp DNA Stool Mini Kit fue el mejor para aislar el ADN de productos altamente procesados que contenían chocolate en diferentes formas. Por otra parte Thion y col. (2002), seleccionaron el estuche...
BUFFER DE LISIS CON SDS.
INTRODUCCION
Una diferencia de este laboratorio es que utiliza para la purificación de ADN, varias rondas consecutivas con la acción de solventes orgánicos (como el cloroformo- alcohol Isoamilico) y sales como el Acetato de sodio. La precipitación se realiza con etanol absoluto y bajas temperaturas.
Ademas el aislamiento del ADN puede noser simple y los métodos no son necesariamente reproducibles para todas las especies. Las especies de las plantas pueden mostrar una gran variabilidad en complejas vías metabólicas, por lo que la composición bioquímica en los tejidos de diferentes especies puede variar considerablemente y no permitir producciones optimas de ADN a partir de un laboratorio, por lo que aun especies muy relacionadasrequieren diferentes protocolos de extracción.
OBJETIVOS:
Desarrollar habilidades en cada estudiante en el manejo de micropipetas y reactivos propios del laboratorio de biología molecular.
Analizar la calidad y cuantificar el ADN de las extracciones mediante la visualización de bandas en geles de agarosa y un marcador molecular.
MARCO TEORICO
METODOLOGIA:
Al iniciar ellaboratorio todos los estudiantes se colocaron los guantes de nitrilo, para luego tomar 200 mg de tejido fresco de la planta en tubos de 1.5 ml y lo marcamos con el sharpie, enseguida agregamos 40 ML de SDS y 20 ML de proteinasa, lo colocamos en baño de maría a 55°C durante 1 hora, luego agregamos 400 ML de fenol, de la fase de abajo del frasco, mesclamos y lo colocamos en la micro centrífuga durante 5minutos.
Recuperamos la fase superior y agregamos 400 ML de cloroformo_ alcohol Isoamilico. Lo mesclamos y centrifugamos durante 5 minutos, recuperamos la fase superior y agregamos 0.1 volúmenes de acetato de sodio 3 M y 2.5 volúmenes de etanol absoluto frio, mezclamos suavemente con pipeta y lo dejamos un día; luego se centrifugo durante 15 minutos y tiramos el sobrenadante, agregamos 400ml deetanol 70 % frio, lo centrifugamos durante 15 minutos, no agitamos, dejamos los tubos boca abajo y por ultimo agregamos 30 ML de buffer TE.
RESULTADOS
CONCLUSION.
Tener habilidad en el manejo de la micropipeta y los reactivos del laboratorio de biología molecular
Cuantificar y analizar la calidad del ADN mediante la visualización de bandas en geles.
Aprender a extraer ADN deforma adecuada siguiendo el protocolo de extracción.
INFOGRAFIA.
EXTRACCION DE ADN FUNGICO
INTRODUCCION
La extracción y purificación de ácidos nucleicos es el paso más importante en estudios de biología molecular y de las técnicas de ADN recombinante. El objetivo de la extracción de ácidos nucleicos es obtenerlos purificados de varias fuentes con elpropósito de conducir a un análisis más específico. La calidad y purificación de ácidos nucleicos es uno de los factores críticos del análisis de PCR. Con el propósito de obtener ácidos nucleicos más puros y libres de contaminantes, se deben utilizar métodos de extracción específicos. Los posibles contaminantes en el ADN que pueden inhibir la reacción de PCR son: SDS, fenol, etanol, isopropanol,acetato de sodio, cloruro de sodio, EDTA, heparina, urea.
MARCO TEORICO.
Muchos estudios han descrito diferentes métodos para la extracción de ADN de buena calidad, tanto en materias primas como productos altamente procesados. Tengel y col. (2001) utilizaron 2 métodos para aislar ADN de diferentes productos, con la finalidad de determinar el mejor método para obtener la máxima calidad,cantidad y pureza de ADN. Mediante el método DNeasy Plant Mini kit se logró aislar ADN de productos con poco procesamiento como son: harina de maíz y soya, proteína de soya y pan de maíz. Mientras que el QIAamp DNA Stool Mini Kit fue el mejor para aislar el ADN de productos altamente procesados que contenían chocolate en diferentes formas. Por otra parte Thion y col. (2002), seleccionaron el estuche...
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