Monografia travesuras de la niña mala

ADN Recombinante
Hasta las postrimerías de 1970, el ADN era una molécula que presentaba
amplias dificultades para su análisis bioquímico. Su gran longitud y monotonía hacían
que la secuencia de nucleótidos pudiese sólo ser estudiada mediante mecanismos
indirectos. Para esto se recurría a la determinación de la secuencia de las proteínas o del
ARN.
Hoy la situación ha cambiado por completo yel ADN ha pasado a ser una de las
moléculas más fáciles de estudiar. Mediante las técnicas que desarrollaremos en este
capítulo, veremos que es factible separar regiones determinadas del ADN, obtenerlas en
grandes cantidades y determinar su secuencia de nucleótidos a una velocidad de varios
cientos de nucleótidos al día. También se nos hace posible alterar un gen (sometido a
ingeniería) ytransferirlo a células en cultivo o a la línea germinal de animales, donde el
gen modificado se incorpora como parte funcional y permanente del genoma.
La tecnología del ADN recombinante constituye una suma de técnicas siendo las más
importantes:
_ La rotura específica del ADN mediante nucleasas de restricción, que facilita el
aislamiento y la manipulación de los genes individuales.
_ Lasecuenciación rápida de todos los nucleótidos de un fragmento purificado de
ADN, que posibilita determinar los límites de un gen y la secuencia de aminoácidos
que codifica.
_ La hibridación de los ácidos nucleicos que hace posible localizar secuencias
determinadas de ADN o ARN, utilizando la capacidad que tienen estas moléculas de
unirse a secuencias complementarias de otros ácidos nucleicos.
_La clonación del ADN, mediante la cual se puede conseguir que un fragmento de
ADN se integre en un elemento génico autorreplicante (plásmido o virus) que habita
en una bacteria, de tal manera que una molécula simple de ADN puede ser
producida generando muchos miles de millones de copias idénticas.
_ La ingeniería genética mediante la cual se pueden alterar secuencias de ADN
produciendoversiones modificadas de los genes, los cuales se pueden insertar a
células u organismos.
Fragmentación, separación y secuenciación de moléculas de ADN
A diferencia de las proteínas, los genes no existen en unidades independientes,
sino que confieren regiones de una molécula de ADN de gran tamaño. Aunque es
posible fragmentar el ADN al azar, es muy difícil que estas porciones contengan undeterminado gen. Así, el purificar un determinado gen constituyó un verdadero
problema hasta la aparición de las endonucleasas de restricción. Estas enzimas, que
pueden aislarse de bacterias, cortan el ADN de doble cadena en lugares discretos,
definidos por la secuencia de nucleótidos, produciendo fragmentos de ADN de tamaño
definido. Distintas especies de bacterias fabrican diferentes endonucleasas derestricción
y cada una de ellas posee especificidades de secuencia, siendo relativamente fácil
encontrar una endonucleasa de restricción que libere un fragmento de ADN que incluya
un determinado gen. El tamaño del fragmento liberado puede utilizarse para purificar el
gen de una mezcla. Una vez purificado, puede amplificarse el fragmento de ADN
Biología Molecular y Celular Lic. Marcelo F.Goyanes
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mediante clonación y determinarse la secuencia de nucleótidos que se encuentran en la
molécula mediante la secuenciación.
Las endonucleasas de restricción son producidas por un amplio número de bacterias, a
las que las protegen degradando moléculas de ADN que han sido transportadas al
interior de las mismas por medio de virus. Así, una bacteria puede eliminar una porción
de ácidonucleico viral que ha ingresado a su genoma.
Cada enzima reconoce una secuencia específica de ADN de entre cuatro y ocho
nucleótidos. Cuando estas secuencias son propias del genoma bacteriano están
protegidas del corte por medio de la metilación; cuando estas secuencias se presentan en
un ADN extraño, no se hallan metiladas por lo cual resultan como blanco del ataque de
las endonucleasas. Se...