Métodos De Separación, Métodos De Identificación Y Métodos De Cuantificación
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
SECCIÓN DE BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANA
BIOQUIMICA GENERALBIOQUIMICA DIAGNOSTICA
TAREA 5:
“MÉTODOS DE SEPARACIÓN, MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN Y MÉTODOS DE CUANTIFICACIÓN”
MÉTODOS DE SEPARACIÓN
ELECTROFORESIS EN GELLa electroforesis es la migración de iones en un campo eléctrico y se utiliza ampliamente para la separación analítica de moléculas biológicas.
La electroforesis en gel se halla entre los métodosmás poderosos y convenientes de separación de macromoléculas; se basan en la filtración en geles y en las movilidades electroforéticas de las moléculas que se intentan separar.
Los geles másusados, poliacrilamida y agarosa, tienen poros de demociones moleculares cuyos tamaños pueden especificarse y retardan las moléculas grandes en comparación con las de menor tamaño. Dado que lasmoléculas de una muestra no pueden abandonar el gel, el movimiento electroforético de las más grandes se ve impedido en comparación con el de las más pequeñas.
Electroforesis en gel de poliacrilamida(PAGE)
Los geles se forman por polimerización de la acrilamida y la N,N´-metileno bisacrilamida incluida por radicales libres en un buffer. Por lo regular el gel se arma como una plancha rectangulardelgada en la que pueden analizarse varias muestras en calles paralelas en forma simultánea, lo que permite comparar muestras similares. El buffer, que es el mismo en ambos reservorios y en el gel, tieneun pH tal que las macromoléculas tienen carga neta negativa, por lo que migran hacia el ánodo ubicado en el reservorio inferior.
Cada muestra, puede contener no más de 10 g de materialmacromolecular, se disuelve en una mínima cantidad de una solución relativamente densa de sacarosa o glicerol que proviene la mezcla con el buffer del reservorio superior. La muestra se coloca en fosas...
Regístrate para leer el documento completo.