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Introducción
Los ácidos nucleicos absorben la luz a una longitud de onda de 260nm. Si una fuente de luz brilla a 260nm en una muestra, la cantidad de luz que pasa por la muestra se puede medir y lacantidad de luz que se absorbe por la muestra se puede inferir1. La concentración de DNA se puede calcular fácilmente con la densidad óptica (DO), donde una DO de 1 a 260nm equivale a unaconcentración de 50ng/ul.
Tradicionalmente, estas medidas se realizan con espectrofotómetros más estandarizados; en este laboratorio, se utilizó un equipo mas preciso con menor riesgo de contaminación. ElNanodrop ND-1000 usa una muestra patentada de retención que sostiene 1 ul de muestra sin necesitar materiales tradicionales como capilares. En breve, este aparato utiliza tecnologías de fibra óptica ytensión superficial, la muestra se mantiene en lugar entre dos superficies ópticas que definen la longitud en una orientación vertical2.
En esta práctica, se cuantificaron ácidos nucleicos, de célulastransformadas de E.coli pUC-19, previamente aislados y conservados en congelación.
Objetivos
Cuantificación de ácidos nucleicos con el uso del NanoDrop
Analisis de resultados
Métodos
MaterialesNanodrop ND-1000
Micropipetas de 2p
Puntas
Toallitas de laboratorio
Guantes
Material activo
1 ul de Agua desionizada
1 ul de E.coli pUC-19
Proceso
1. Una vez que se dejó descongelar un pocolas muestras de pUC-19, se hizo uso del Nanodrop.
2. Para la utilización del Nanodrop, primeramente se abre el programa en la computadora, se selecciona la opción de ácidos nucleicos, ya que es loque se quiere cuantificar, y se calibra añadiendo 1 ul de agua desionizada.
3. En el programa se selecciona la opción de “Blank” y se verifica que este en ceros. Una vez calibrado, se limpia contoallitas de laboratorio donde se colocó la muestra.
4. Igual que el agua desionizada, se agregó un micro litro del pUC-19 y se dio presionó la opción del programa “Measure”.
5. Se repitió el proceso...