OBTENCIÓN DE PROTEINAS

Prácticas de Biotecnología

P1.

OBTENCIÓN DE PROTEÍNAS.

Objetivo:
Hacer prácticos todos los conocimientos adquiridos en cuanto a la obtención de proteínas a partir de
muestras naturales.
Fundamento:
Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas
soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas atemperaturas superiores a los
70ºC o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, enzimas, plantas, sustancias caotrópicas, etc.
La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes
indicados, que al actuar sobre la proteína la desordenan por la destrucción de su estructura terciaria y
cuaternaria.
Otras técnicas alternativas a lacoagulación son el intercambio iónico y la micro y ultrafiltración.

Material:
-

-

Mechero.
Tubos de ensayo.
Tubos de centrífuga.
Vasos de precipitados.
Pipetas de 10 mL.
Pipetas de Pasteur.
Espátula.
Placa calefactora.
Centrifugadora.

-

Ácido acético.

-

Huevo.
Leche

Reactivos:

Muestras:

Procedimientos:
•
•

OBTENCIÓN DE OVOALBÚMINA.
OBTENCIÓN DEL SUEROLÁCTICO.

Salvador Camacho Garrido

1

Prácticas de Biotecnología

OBTENCIÓN DE OVOALBÚMINA:
1. De un huevo de gallina separa la yema y
preserva la clara 1 .
2. Añade agua destilada y agita hasta que aún
quede una mezcla espesa.
3. Coloca en un tubo de ensayo una pequeña
cantidad de clara de huevo.
4. Añadir 5 gotas de ácido acético y calentar
el tubo a la llama del mechero 2 .
5.Agita hasta obtener una disolución
homogénea. Caso de que existan flóculos,
eliminarlos mediante centrifugación a 4000
rpm durante 5 min. Con ello se obtiene una
disolución de aprox. 5 mg/ml de proteína 3 .
6. Preserva tanto las aguas madres como el
centrifugado a temperatura de refrigeración
en sendos tubos de ensayo.

OBTENCIÓN DEL SUERO LÁCTICO:
1.
2.
3.
4.

Toma unos 10 ml deleche.
Calienta al baño maría.
Añade 1 ml de ácido acético.
Agitando continuamente. Se forma un
precipitado que contiene la caseína 4 y la
grasa quedando en disolución 5 , los
glúcidos, las sales y las proteínas solubles 6 .
5. Centrifuga.
6. Preserva tanto las aguas madres como el
centrifugado a temperatura de refrigeración
en sendos tubos de ensayo.

1

De esa cantidad, el 10% aprox. esovoalbúmina, la
proteína mas abundante en la clara.
2
De forma alternativa, de una clara de huevo de
gallina, toma entre 1-2 g con la ayuda de una espátula
o una pipeta Pasteur. Diluye 20 veces con tampón
fosfato.
3
Caso de suministrar una disolución de albúmina de 5
mg/ml, no es necesario realizar la extracción.
4
Fosfoprotéina insoluble.
5
Se denomina suero lácteo.
6Lactoalbúmina e inmunoglobulinas.
Salvador Camacho Garrido

2

Prácticas de Biotecnología

P2.

RECONOCIMIENTO DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS.

Objetivo:
Hacer prácticos todos los conocimientos adquiridos en cuanto a la determinación cualitativa de aminoácidos,
péptidos y proteínas a partir de muestras naturales.
Fundamento:
Los aminoácidos pueden detectarse con reactivos que reaccionen con susgrupos característicos, el carboxilo,
el amino u otros de la cadena lateral. Aunque el número de ensayos es muy grande, uno de los más utilizados
es la detección con ninhidrina, que produce un color púrpura que en algunos casos puede ser rosa o rojizo. Si
partimos de proteínas debemos hidrolizarla. La hidrólisis puede ser ácida (HCl 6N/90ºC/18 h), básica y
enzimática.
La reacción del Biuret laproducen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la
presencia del enlace peptídico (-CO-NH-) que se destruye al liberarse los aminoácidos.
Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja
denominada biuret, que en contacto con una solución de sulfato cúprico diluida, da una coloración violeta
característica....