Pcr en tiempo real

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“Técnica de PCR en Tiempo Real”
AMR, DV, ASO

El PCR en tiempo real, es una técnica de laboratorio alterna a la PCR convencional utilizada para identificar agentes patógenos, detección demutaciones, detección de cuadros infecciosos virales, estudio de apoptosis celular, etc. Pero a diferencia de la PCR convencional, la PCR en tiempo real permite amplificar y al mismo tiempo cuantificargráficamente (en tiempo real) el resultado de la amplificación de un fragmento de ADN deseado.
Básicamente la PCR en TR tiene la misma base funcional de la PCR convencional. Para realizar la técnica dePCR en TR se utilizan varios elementos: una muestra de ADN, primers, dNTP´s, DNA polimerasa, agentes fluorescentes, un termociclador y un lector. Sin embargo, el termociclador se compone también deun lector de fluorescencia que se encarga de lanzar un haz de luz para detectar la fluorescencia emitida sobre un fluorocromo excitado que es colocado corriente arriba del primer. Además, permitecambiar, a grandes velocidades, la temperatura de las muestras. De esta manera, al igual que en la PCR convencional, se pueden detectar 3 fases de temperaturas específicas:
1. Fase dedesnaturalización (95°C): la cadena en estructura doble es desnaturalizada, es decir, separada para dejar dos cadenas simples de ADN.
2. Fase de Alineamiento (50-60°C): A cada cadena simple de ADN se le une unprimer o cebador y un marcador fluorescente.
3. Fase de Elongación (70°C): La DNA polimerasa se une al fragmento de ADN y comienza la replicación de la cadena, teniendo como resultado elfragmento deseado copiado en 2 cadenas dobles hijas. En la PCR en TR el marcador fluorescente se activa con la unión de la polimerasa emitiendo fluorescencia que será registrada por el lector.
Elmecanismo de funcionamiento de la PCR en tiempo real está basado en la replicación de un fragmento de DNA por medio de dos métodos de detección de fluorescencia:
* Agentes intercalantes: Se trata de...
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