Polimorfimos

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Laboratorio de Biología Molecular

Departamento de Laboratorios Clínicos

Facultad de Medicina

Pontificia Universidad Católica de Chile



DIAGNOSTICO RAPIDO DE ANEUPLOIDIAS DE LOS CROMOSOMAS 13, 18, 21 y SEXUALES EN LIQUIDO AMNIOTICO Y EN SANGRE PERIFERICA DE RECIEN NACIDOS UTILIZANDO LAS TECNICAS DE FISH Y PCR FLUORESCENTE



FELIPE IGNACIO ARANIS AQUEVEQUEDirector de tesis: Dra. Marcela Lagos Lucero



Mayo 2010



Memoria Profesional entregada a la Facultad de Ciencias Biológicas de la Pontificia Universidad Católica de Chile, en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al Título de Bioquímico

AGRADECIMIENTOS



En primer lugar, quiero agradecer al Laboratorio de Biología Molecular del Departamento de Laboratorios Clínicos dela Facultad de Medicina de la Pontificia Universidad Católica de Chile, por haberme permitido desarrollar este proyecto, aportando con toda la infraestructura y recursos necesarios.



Muchas gracias a la Dra. Marcela Lagos por aportar con toda su experiencia y conocimiento, además de la confianza y apoyo en mi persona. No puedo dejar de destacar y agradecer a la BQ Helena Poggi, quien meaconsejó y supervisó, no sólo en el ámbito técnico-profesional, sino también en el ámbito personal.



También quiero agradecer a todo el personal del laboratorio por haberme acogido, entendido y tolerado durante más de un año. Especiales agradecimientos a las TM Eliana Romeo, Gloria Mella y Mónica Abarca, por toda la paciencia que tuvieron conmigo y por todos los acertados consejos yenseñanzas que obtuve de ellas. Además, doy gracias al Biólogo Eduardo de la Rosa, por su contribución en la confección de este trabajo.



Es innegable todo el aporte efectuado por el Lic. Diego Gutiérrez, quien siempre aportó con consejos muy acertados y con la cuota de humor que siempre se agradece en un trabajo como éste. Además, quiero destacar al Lic. Patricio Mujica, por su importantecontribución bibliográfica.











INDICE DE MATERIAS



AGRADECIMIENTOS ii

INDICE DE MATERIAS iii

INDICE DE TABLAS vi

INDICE DE FIGURAS vii

NOMENCLATURA viii

RESUMEN x

ABSTRACT xi



INTRODUCCION 1



OBJETIVOS 9

Objetivo general 9

Objetivosespecíficos 9





MATERIALES 10

Extracción de ADN 10

Amplificación de STR 10

Electroforesis capilar con detección fluorescente 12

Análisis de los productos de PCR 13

Disgregación de líquidos amnióticos 13

FISH 14



METODOS 16

Obtención de muestras 16

Almacenamientode muestras 16

Extracción de ADN 17

Cuantificación de ADN 17

Amplificación de STR 18

Electroforesis capilar con detección fluorescente 20

Análisis e interpretación de resultados de PCR 20

Determinación de la utilidad de los marcadores del kit AneufastTM 21

Preparación y almacenamiento de soluciones para disgregación y FISH21

Disgregación de líquidos amnióticos 24

FISH 26

Análisis e interpretación de resultados FISH 31



RESULTADOS 32

Estandarización de protocolo para QF-PCR 32

Análisis de muestras clínicas por QF-PCR 43

Utilidad de los marcadores utilizados en QF-PCR 45

Estandarización de protocolo para FISH 47Análisis de muestras clínicas por FISH 52



DISCUSION 55

CONCLUSIONES 63

BIBIOGRAFIA 64





INDICE DE TABLAS



TABLA I: Marcadores incluidos en el kit AneufastTM 11

TABLA II: Sondas incorporadas en el kit Aneuvysion® (Vysis) 14

TABLA III: Distribución de los partidores en cada mezcla

de reacción del kit AneufastTM...