Práctica No. 2: Reacción De La Deshidrogenasa Succinica Y De La Citocromo Oxidasa

DIVISION DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD
LICENCIATURA EN CIENCIAS NUTRICIONALES

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
PRÁCTICA NO. 2: REACCIÓN DE LA DESHIDROGENASA SUCCINICA Y DE LA CITOCROMO OXIDASA

DRA: MARIBEL PLASCENCIA JATOMEA

PARTICIÓN 2 EQUIPO 10:
GALVEZ PACHECO DANITZA ALEJANDRA
LÓPEZ COVARRUBIAS MELISSA
WONG CHAN EVA JESSENIA

HORARIO:
8:00 – 10:00 HRS.

VIERNES 12 DEOCTUBRE DE 2012.

Introducción.
La enzima Succínico Deshidrogenasa está siempre unida al sistema Citocromo Oxidasa, por lo que no hay un método que separe bien a la Succínico Deshidrogenasa de las inclusiones celulares. Por lo tanto, las pruebas para esta enzima se deben llevar a acabo en presencia de alguno o de todos los componentes del sistema Deshidrogenasa Succínico-Citocromo.
La CitocromoOxidasa puede inactivarse por el uso del cianuro o llevando a cabo la medición aeróbicamente. En esas condiciones y añadiendo un aceptor de hidrógeno se puede medir fácilmente el “Sistema Succínico Deshidrogenasa”.
La expresión “Sistema Succinato Deshidrogenasa” se refiere al sistema que cataliza la oxidación aerobia del succinato y que probablemente incluye al citocromo b, además de laSuccinato Deshidrogenasa y el aceptor de hidrógeno.
La actividad del sistema se puede medir por uno de tres métodos, dependiendo de la pureza relativa de la enzima. El método de Thumberg depende de la proporción de reducción de un aceptor de hidrógeno adecuado bajo condiciones anaerobias. Las observaciones se hacen ya sea fotométricamente o visualmente, siendo el punto final el tiempo requerido para lareducción del 90% del aceptor de hidrógeno. Comúnmente se emplean el azul de metileno y el 2,6-diclorofenoindofenol como aceptadores de hidrógeno. La concentración de la enzima debe ajustarse, de tal manera, que se obtenga el 90% de reducción en cinco o diez minutos.
El método manométrico depende de la medición del consumo de oxígeno durante la oxidación del succinato, en presencia del cianuroy del azul de metileno.
El método espectrofotométrico depende de la medición de proporción del ferrocianuro de potasio K3Fe(CN)6,en presencia de suficiente KCN para inhibir a la Citocromo Oxidasa. No se sabe qué componentes del sistema Succínico Oxidasa estén involucrados en la reducción del ferrocianuro, aunque probablemente la Succinato Deshidrogenasa sea la más importante. Este método esexcelente para medir la Succinato Deshidrogenasa de las plantas.
Los Citocromos de tipos a, a1, a2, a3 se definen por las características espectrales de los pigmentos y sus compuestos de monóxido de carbono.
El Citocromo a3, es una oxidasa, que es la enzima respiratoria terminal en los tejidos de mamíferos, levaduras, plantas superiores, algunas bacterias y algunas otras células. La enzima de lostejidos de mamífero, levaduras y plantas superiores, es parte del “Sistema Citocromo c Oxidasa”, que se oxida por el oxígeno molecular y rápidamente al Citocromo c reducido.
El Citocromo a con frecuencia, pero no siempre, viene junto con el Citocromo a3 en las células. Sus picos en el espectro de absorción se sobreponen con los del Citocromo a3, pero no reaccionan con monóxido de carbono.
Laspruebas para el Citocromo a3 o Citocromo Oxidasa pueden hacerse basándose en las propiedades espectrales o en su actividad. La enzima se identifica por la formación de un compuesto de monóxido de carbono del pigmento reducido, con picos en el espectro de absorción a 590 y 430 nm.
En base a la actividad en la oxidación del Citocromo c. El Citocromo a3 de los tejidos de los mamíferos, levaduras yplantas superiores, se puede probar midiendo la proporción de oxidación de Citocromo c reducido por los extractos celulares. No se pueden utilizar células totales, puesto que el Citocromo c no puede penetrar células.
Objetivo.
* Determinar de manera sencilla la actividad enzimática de dos enzimas importantes en el metabolismo normal.
* Conocer la ubicación y la importancia metabólica de...