Pr ctica 6 An lisis microbiol gico de aguas por la t cnica del N mero M s Probable NMP

Asignatura: Microbiología Ambiental
Práctica N° 6: Análisis microbiológico de aguas por
la técnica del Número Más Probable (NMP)
I Periodo del 2015
Análisis microbiológico de aguas por la técnica del Número Más Probable (NMP)

1.

Objetivo

-Aplicar la técnica de Número Más Probable para la estimación del número de microorganismo en análisis
microbiológicos.
2.

Introducción

Todos los métodos derecuento de viables requieren la separación de los microorganismos en unidades
reproductoras individuales. Además, son selectivos para determinados microorganismos; el grado de
selectividad varía según la técnica específica de recuento de viables. Esta selectividad es un inconveniente
cuando se intenta calcular la biomasa total microbiana en un ecosistema, pero permite el recuento de tiposparticulares de microorganismos. Los métodos empleados para el cálculo del número de microorganismos
por técnicas de recuento de viables deben recuperar microorganismos vivos de muestras ambientales,
mantener la viabilidad de las poblaciones microbianas que hay que contar, y permitir su crecimiento en el
laboratorio para que puedan detectarse y realizarse el recuente. Existen numerosas metodologías parael
cultivo de diversos microorganismos, existen miles de medios diferentes para el cultivo de diferentes especies
de bacterias, de arqueobacterias, de hongos, de algas y protozoos. Hay dos enfoques básicos para el recuento
de viable: 1. La técnica de recuento en placa y 2. La técnica del número más probable (NMP) (Atlas y Bartha,
2002)
La técnica de Numero Más Probable, también conocida como elmétodo de tubos múltiples o de extinción de
muestra por diluciones, se basa en la presencia o ausencia del microorganismo en una serie de diluciones
sucesivas de suelo o de otro material, con la interpretación de los resultados como un estimativo de la
probabilidad del número de microorganismos en una tabla estadística. Se calcula así la densidad de una
población sin hacer un conteo real de losmicroorganismos o de las colonias.
Para lograrlo se han de emplear diluciones de la muestra. En medios apropiados se determina la presencia o
ausencia de microorganismos que se va a estimar, usualmente en caldos y por detección visual fácil, como
cambio de color, turbidez, formación de películas, gas, entre otros, o bien alguna transformación del medio
que sea detectable mediante prueba química.
Encualquiera de los casos, una lectura positiva (+) indica que por lo menos un microorganismo estaba
presente en la alícuota sembrada y llevada a incubación. Las diluciones decimales se realizan con alícuotas 1
g o 1 ml en 9 ml del diluyente agua peptonada o solución salina, según la exigencia del microorganismo con
el que se está trabajando. Se puede usar otras proporciones 10/90, 0.1/0.9 ml, etc.Para las diluciones usualmente se utilizan volúmenes de 10, 1 y 0.1 ml de muestra que es agregado al cultivo
líquido que se va a usar, como se indica en las tablas de anexo (anexo a y b). Normalmente se siembra las
diluciones con tres o cinco réplicas y se utilizan las tablas de NMP correspondientes.
Según la legislación colombiana, se aceptó para agua potable hasta el 2000 por el Decreto 475 de1998 del
Ministerio de Salud; no es aceptada por la Resolución 2115 de 2007 para agua de consumo y es aceptada para
agua residual según Decreto 1594 de 1984 del Ministerio de Salud.
Fundamento del método: El método evidencia la presencia de bacterias coliformes aprovechando su
capacidad para fermentar la lactosa, la cual es suministrada en el medio de cultivo; la presencia de tales

Docente: MaríaAlexandra Méndez L.

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Asignatura: Microbiología Ambiental
Práctica N° 6: Análisis microbiológico de aguas por
la técnica del Número Más Probable (NMP)
I Periodo del 2015
bacterias confirma por la captura de gas, lo cual indica que la lactosa se ha fermentado, y por el cambio de
color en el medio debido a su acidificación.
Por tanto, los resultados se expresan en Número Más Probable de...