Practica 2 aminoacidos





INTRODUCCIÓN.

Los métodos de separación de proteínas explotan las diferencias bioquímicas en la solubilidad de las mismas, su tamaño, carga, características de adsorción y su afinidad biológica por otras moléculas.
La solubilidad de las proteínas depende, no sólo de la variedad de grupos residuales de ácidos aminados y de la manera en que se pliega la cadena peptídica, sino también de laspropiedades del sistema solvente en el cual se encuentra la proteína. Los cuatro factores principales que afectan la solubilidad se relacionan todos con las estructuras secundaria y terciaria de las proteínas.
Estos factores son: a) la fuerza iónica, b) el pH, c) la temperatura, y d) la constante dieléctrica del solvente.

OBJETIVOS.

Conocer los agentes fisicoquímicos que influyen en lasolubilidad de las proteínas.
Aprender a separar las proteínas aprovechando sus características estructurales.
Determinar el punto isoeléctrico de la insulina aprovechando sus propiedades de solubilidad a diferentes valores de pH.


RESULTADOS.

1. Separación de proteínas por precipitación con sales (salting out).

Reacción de Biuret
Interpretación
Filtrado 1
Positiva
Presencia de proteínasPrecipitado 1
Positiva
Presencia de proteínas
Filtrado 2
Positiva
Presencia de proteínas
Precipitado 2
Positiva
Presencia de proteínas

2. Precipitación por efecto del pH y de solventes.
Tubo No.
Observación 1

Observación 2
Clara de huevo + HCl 0.1N
Precipitó un poco
+ Etanol 96°
Precipito más
Clara de huevo + NaOH 0.1N
No precipito
+ Etanol 96°
No hubo precipitación
Clara de huevo + Regulador deacetatos 0.1 M, pH 4.7
Precipito
+ Etanol 96°
Precipito más






3. Precipitación por metales pesados.

Tubo
Observación
Clara de huevo + Cloruro mercúrico
Precipitó la proteína
Clara de huevo + nitrato de plata
Precipitó la proteína
Clara de huevo + acetato de plomo
Precipitó la proteína
Clara de huevo + cloruro de bario
No precipitó la proteína
Clara de huevo + cloruro de sodio
No precipitó laproteína
Clara de huevo + agua
No precipitó la proteína

4. Determinación del punto isoeléctrico de la insulina.

Tubo
pH
Observaciones
0.23 ml de ácido acético 0.2 M + 0.02 ml de acetato de sodio 0.2 M + 0.06 ml de insulina
3.699
No precipito
0.15 ml de ácido acético 0.2 M + 0.10 ml de acetato de sodio 0.2 M + 0.06 ml de insulina
4.584
Precipito muy poco
0.05 ml de ácido acético 0.2 M + 0.20 ml deacetato de sodio 0.2 M + 0.06 ml de insulina
5.362
Precipito más
0.01 ml de ácido acético 0.2 M + 0.24 ml de acetato de sodio 0.2 M + 0.06 ml de insulina
6.14
No precipito
0.25 ml de acetato de sodio 0.2 M + 0.06 ml de insulina
9.079
No precipito


ANÁLISIS DE RESULTADOS

En la reacción de separación de proteínas por precipitación con sales (salting out) obtuvimos que el filtrado 1 y 2, tanto comolos precipitados 1 y 2 dieron para la prueba de Biuret positivo, lo cual nos pone de manifiesto la presencia de proteínas. El (NH4)2SO4 al ser una sal neutra con fuerza iónica elevada provoco la precipitación de las proteínas de la clara de huevo, esto debido a que el (NH4)2SO4 disminuyo la solubilidad de las proteínas que constituyen a la clara de huevo, la proteína más abundante es laovoalbúmina, la sal entró en competencia con la proteína por el agua. Al aumentar la concentración de sal, esta desplaza a la proteína, por lo que tiene mayores interacciones con el agua. Al disminuir la solubilidad de las proteínas, significa la formación de agregados proteínicos que precipitan.
La presencia de proteínas en los filtrados 1 y 2 pudo deberse a que la cantidad de sal agregada no fue lasuficiente para provocar la precipitación de todas las proteínas, por lo cual las proteínas que permanecieron solubilizadas pasaron a través del papel filtro.
En la reacción de efecto del pH y de solventes sobre las proteínas observamos que solo hubo precipitación al agregar HCl y la solución reguladora de acetatos; al agregar el HCl se disminuyeron los grupos cargados de los aminoácidos...