Practica 3 Microbiologia

Unidad 2. Técnicas básicas de microbiología

Práctica 3. Preparaciones Microbiológicas 1ª sesión
3.1. Preparaciones húmedas 3.2. Gota pendiente 3.3. Preparaciones fijas 3.4. Tinción simple

Objetivos
● Realizar diferentes preparaciones microbiológicas a partir de muestras naturales y cultivos puros. ● Describir las características morfológicas y de locomoción de microorganismos que seencuentran en muestras naturales. ● Realizar frotis fijos y tinciones simples ● Identificar y describir las características morfológicas y de agrupación de bacterias y hongos levaduriformes

Introducción
El tamaño de los microorganismos impide detectarlos a simple vista, por lo que es esencial el uso del microscopio. Para que un objeto pueda ser percibido a través del microscopio, este debe poseercierto grado de contraste con el medio circundante. Para aumentar el contraste de los microorganismos y lograr una mejor observación de los mismos, se emplean diferentes técnicas de tinción, las cuales se basan en la capacidad de los microorganismos para retener (o no) ciertos colorantes lo que depende de la carga de la célula y del colorante.

Materiales
● Muestras: Agua de charco Pulque Algúnalimento en descomposición ● Cultivos puros de: Bacillus sp. Micrococcus luteus Serratia marcescens Staphylococcus sp Streptococcus sp Streptomyces sp Saccharomyces cerevisiae

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● Material por equipo: 1 Microscopio Aceite de inmersión Pipetas Pasteur con bulbo Preparaciones fijas 1 frasco gotero con Azul de metileno 1 frasco gotero con safranina 1frasco gotero con cristal violeta ● Material que deben tener los alumnos: 2 Mecheros 2 Asas Portaobjetos excavados Portaobjetos Cubreobjetos Charola para tinción Puente de vidrio Piseta Pinzas Paño limpio Papel seda Letras pequeñas recortadas Agua de charco o pulque Palillos Vaselina sólida

Metodología
Lavar y desengrasar los portaobjetos y cubreobjetos. Para ello emplear jabón líquido y agua;enjuagar varias veces con alcohol al 95 %, ponerlos a secar y flamearlos 2 a 3 veces. 3.1. Preparaciones húmedas 1. Con una pipeta Pasteur colocar una gota de la muestra (agua o de pulque) en el centro del portaobjetos, cubrir la gota con un cubreobjetos. 2. Observar al microscopio con los objetivos de 10 x y 40 x (nunca con el objetivo de inmersión. 3. Esquematizar la morfología y movimiento de losmicroorganismos observados. 3.2. Gota pendiente 1. Con un palillo colocar un poco de vaselina alrededor de la concavidad del portaobjetos excavado. 2. Con una pipeta Pasteur tomar una gota de la muestra y colocarla en el centro del cubreobjetos. 3. Invertir el portaobjetos excavado y colocar la excavación sobre el cubreobjetos que tiene la muestra, procurando que ésta quede en el centro de laconcavidad. 4. Oprimir suavemente la zona engrasada a fin de sellar y disminuir la evaporación. 5. Invertir la preparación y observar al microscopio con los objetivos de 10 x y 40 x 6. Esquematizar la morfología y movimiento de los microorganismos observados.

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3.3. Preparaciones fijas 1. Etiquetar los portaobjetos en uno de sus extremos 2. Colocar unapequeña gota en el centro del portaobjetos 3. Esterilizar el asa de siembra y en condiciones asépticas tomar una pequeña cantidad del cultivo en medio sólido. 4. Con el asa mezclar suavemente el cultivo con el agua hasta obtener una suspensión homogénea y extenderla en el centro del portaobjetos. 5. Esterilizar el asa. 6. Si la muestra se toma de un cultivo líquido, no es necesario poner la gota deagua, sino que se extiende directamente sobre el portaobjetos. 7. Dejar secar totalmente la preparación a temperatura ambiente. 8. Fijar el frote con calor. Cuando el frote está perfectamente seco pasar de cuatro a cinco veces el portaobjetos por la flama del mechero y dejar enfriar. 3.4. Tinción simple 1. Cubrir el frote fijo con 3 gotas del colorante básico (azul de metileno, safranina o cristal...