practica 4











FUNDAMENTO
La mayor parte de las proteínas muestran su solubilidad mínima en su punto isoeléctrico. Algunas de ellas son tan insolubles a este pH; por ejemplo la insulina, la caseinapueden precipitarse de sus soluciones por ajuste del pH al valor de su punto isoelectrico
MATERIAL
Leche no pasteurizada
HCl 0.1 N
NaOH 0.1 N
Solución amortiguadora de acetatos pH 4.6
Indicador verde debromocresol al 0.04%
Acetato de sodio 0.2 N
Acetato de sodio 0.1 M
Ácido acético 0.1 M
Agua destilada acidulada (100 ml de agua + 10 gotas de HCl 0.1 N)
















METODOLOGIA
Dilúyase 5 ml deleche con 5 ml de agua, en un matraz Erlen-meyer de 50 ml
Agregar HCl 0.1 N con una pipeta mientras se agita con suavidad la leche diluída, hasta que se forme el primer precipitado abundante.
Dejarque el precipitado se deposite en el fondo del matraz y tómese el pH del suero sobrenadante por medio del indicador verde de bromocresol, tomando con una varilla un poco del suero y depositándolo juntocon el indicador, en un vidrio de reloj.
Es conveniente comparar con una gota del indicador puesta con la solución buffer pH 4.6; si es necesario se añade sosa o ácido hasta aproximarse a ese pHCentrifugar la suspensión durante 5 minutos
Desechar el suero sobrenadante
Llenar el tubo de la centrifuga con agua destilada acidulada, disolviendo el precipitado con la ayuda de una varilla de vidrioCentrifugar nuevamente y tirar el líquido de lavado
Añadir al precipitado 12.5 ml de acetato de sodio 0.2 M; disuélvase el precipitado con la varilla hasta formar una suspensión fina

DETERMINACION DELPUNTO ISOLECTRICO DE LA CASEINA POR ESTUDIO DE SOLUBILIDAD
Indicaciones generales: se tratará de en un principio de preparar soluciones con valores de pH que caigan entre cerca del puntoisoeléctrico de la caseina, logrando que la concentración de la proteína sea tal que pueda observarse visualmente el lugar de la máxima precipitación, se usaran soluciones buffer de acetato con lo que se...