Practica 5 Pancreatina

Unidad Regional Sur
Departamento de Ciencias Biológicas y
Agropecuarias
Prácticas de Laboratorio de
Bioquímica II
Practica N°5
Pancreatina
Profesora:
María Guadalupe Hernández Salomón
Alumnos:
Borbón Peña Mirna Guadalupe
Contreras Núñez Marco Antonio
Gracia Cienfuegos Martha Guadalupe
Velderrain Armenta Felizardo
Zamudio Vale Marisol

Navojoa, Sonora,

Viernes, 27 de febrero de 2015.INTRODUCCIÓN
Entre las clases de enzimas que catalizan la hidrólisis de diversos ésteres hay diferencia
entre las Lipasas y las Esterasas. Esta diferencia se basa en su especificidad preferencial
selectiva. Los substratos naturales de las Lipasas son aceites y grasas, o sea Triglicéridos
de ácidos grasos, de cadena larga, mientras que los substratos naturales de las
Esterasas, son los Esteres sencillos deácidos de bajo peso molecular. Sin embargo las
dos clases de Enzimas son sumamente inespecíficas en cuanto a su acción, y la
naturaleza del ácido graso o del alcohol tiene efecto no en la especificidad sino en la
velocidad de la reacción.
La hidrólisis de los triglicéridos que consumen los animales superiores se lleva al
cabo principalmente en el intestino delgado, por medio de enzimas lipolíticaselaboradas
en el páncreas. Las lipasas pancreáticas existen en dos tipos: las específicas para romper
la unión éster en posición alfa o alfa prima de los triglicéridos, y las específicas para las
uniones beta. La hidrólisis completa de los Triglicéridos procede entonces por pasos.
Primero se hidrolizan rápidamente las uniones alfa y alfa prima, y luego lentamente se
rompen las uniones beta.
Estasreacciones se aceleran con las sales biliares como Taurocolato o Glicocolato
de sodio, que emulsifican y solubilizan a los lípidos. Las sales biliares vienen en la bilis,
secreción del hígado que pasa al intestino por medio de la vesícula biliar. La descarga de
la bilis en el intestino se provoca por la hormona Colecistocinina, que se sintetiza en el
intestino delgado y se libera a la circulación enrespuesta a la presencia de lípidos en el
duodeno.
La Lipasa (EC. 3.1.1.3) (Triacil Glicerol Acil Hidrolasa) También llamada
antiguamente Esteapsina, extraída de diferentes fuentes biológicas, contiene siempre
diversas fracciones proteicas de muy diversos pesos moleculares, que van desde 39,000
hasta 200,000, todas ellas con actividad lipolítica. Estas estereasas hidrolizan substratosemulsificados y no atacan a substratos en verdadera solución. Se cree que esto se debe a
que la enzima se adsorbe a su substrato emulsificado, y la velocidad inicial de reacción
está en función del número de moléculas de enzima adsorbidas en la interfase. Se llama
Pancreatina a un extracto de páncreas con fuerte actividad lipoítica.

FUNDAMENTO DE LA PRÁCTICA
En esta práctica usaremos el método titrimétricopara detectar la acción de la Lipasa. El
método consiste en estimar por titulación la cantidad de ácidos grasos liberados de los
ésteres. Como los substratos naturales de las Lipasas, o sea los ésteres de ácidos grasos
de cadena larga (10 a 18 carbonos), son prácticamente insolubles en agua, es necesario
trabajar con emulsiones de los substratos. La principal dificultad aquí ciertamente es lapreparación de emulsiones estables y reproducibles, puesto que la velocidad de la
hidrólisis dependerá del estado de dispersión de la enzima. Cualquier sustancia que

afecte a la tensión interfacial tendrá efecto en la actividad de la enzima, o sea que la
enzima actúa en la interfase agua – lípido. Así que aumentando la proporción de la
interfase agua – lípido, aumentará la acción de la Lipasa. Unode los emulsificantes más
comúnmente empleados es el Alcohol Polivinílico (PVA), (ver sección de preparación de
reactivos). Pero se han usado también la Albúmina, el Oleato de Sodio, Goma Arábiga,
Goma Acacia, Bentonita, etc. Los Triglicéridos que contengan Ácidos Esteárico y
Palmítico, son los más difíciles de emulsificar.
En la primera parte de la práctica veremos el efecto de las sales...