Practica biomoleculas

Comunicación corta

Biotecnología Vegetal Vol. 6, No. 1: 59 - 62, enero - marzo, 2006

Extracción de proteínas a partir del fluido intercelular en hojas de
banano, cultivar ‘Grande naine’ (Musa AAA)
Milady Mendoza-Rodríguez , Aminael Sánchez-Rodríguez, Michel Leiva-Mora, Mayra Acosta-Suárez, Luis
Rojas, Elio Jiménez, Orelvis Portal. *Autor para correspondencia.
Instituto de Biotecnologíade las Plantas (IBP). Universidad Central Marta Abreu de Las Villas, Carretera a Camajuaní
km 5 ½, Santa Clara, Villa Clara, CP 54 830, Santa Clara, Villa Clara, Cuba, e-mail: milady@ibp.co.cu
RESUMEN
La extracción y caracterización de las proteínas involucradas en los procesos de patogénesis en plantas ha sido
una herramienta fundamental para el estudio de diferentes patosistemas. Elestudio de las proteínas secretadas
a los espacios intercelulares de las hojas, en respuesta a factores bióticos y abióticos, constituye un paso
fundamental para lograr este propósito. Se realizó la extracción de proteínas intercelulares, a partir de tejido de
hojas de plantas adultas, de banano Musa AAA (subgrupo Cavendish) cultivar ‘Grande naine’, sanas y enfermas
con síntomas en diferentesestadios de desarrollo de la enfermedad Sigatoka negra. Fragmentos de hoja de 2
cm2 se infiltraron al vacío, se centrifugaron y al recobrado obtenido se le añadió sulfato de amonio al 80% (p/v) para
la precipitación de las proteínas, las que posteriormente se analizaron en un gel de poliacrilamida desnaturalizante
al 12%. Se obtuvo una concentración de proteínas promedio de 0.43 mg.ml-1 paramuestras sanas y de 0.83 hasta
1.0 mg.ml-1 en las infectadas. Los resultados constituyen el paso inicial en el estudio del patosistema MusaMycosphaerella fijiensis, lo que permitirá conocer acerca de las proteínas involucradas en la interacción, como
aspecto esencial a tener en cuenta para el desarrollo de las futuras estrategias de resistencia a patógenos.
Palabras clave: electroforesisdesnaturalizante, precipitación salina, purificación de proteínas
ABSTRACT
The extraction and characterization of proteins involved in plant pathogenesis process, has been an important tool
for pathosystem study. The study of secreted proteins to intercellular space of leaves in response to biotic and
abiotic factors constitutes an important step to reach this purpose. Intercellular proteins, fromhealthy and infected
leaves tissue of banana plants Musa AAA (subgroup Cavendish) cultivar ‘Grande naine’ at different stages of
development of the Black Sigatoka disease were extracted. Leaves fragments of 2 cm2 were infiltrated at vacuum,
centrifuged and 80% (w/v) of ammonium sulphate for protein precipitation was added to the collected intercellular
fluid , which were analyzed in a denaturantpolyacrilamide gel at 12%. The average protein concentration
obtained was 0.43 mg.ml -1 for healthy and 0.83 until 1.0 mg.ml-1 for infected samples from intercellular space.
The results are the first step in Musa-Mycosphaerella fijiensis pathosystem study, allowing to know about the
proteins involved in the interaction, as an essential aspect to take into account for the development of futurestrategies of resistance to pathogen.
Key words: denatured electrophoresis, protein purification, salt precipitation

INTRODUCCIÓN
Desde la aparición de la enfermedad Sigatoka negra,
causada por el hongo ascomiceto Mycosphaerella
fijiensis Morelet (Pseudocercospora fijiensis Morelet,
anamorfo) (Crous, 2003), numerosas han sido las
pérdidas en el cultivo de bananos y plátanos a nivelmundial. Sin embargo, pocas han sido las
investigaciones llevadas a cabo en esta interacción,
por lo que la información existente es muy limitada.
Aún se desconoce el mecanismo empleado por el
patógeno para infestar Musa spp., así como las
interacciones específicas que ocurren durante el
proceso infeccioso (Lepoivre et al., 2003; Pérez et
al., 2003).
El estudio de las interacciones...