Practica De Enzimas

Universidad Autónoma Metropolitana
Unidad Iztapalapa

Practica 7
“Función de los peroxisomas: Actividad enzimática de las peroxidasas”

Laboratorio de Estructura y Función Celular

Grupo BC01
Equipo:
Isabel Alicia Luna Hernández
Valencia Vilchis Yolanda Gabriela
Fabián Manuel Sarmiento Muñoz

08 de Marzo de 2013

Introducción
Los peroxisomas son orgánulos limitados pormembrana simple que contienen enzimas oxidativas en particular catalasa y otras peroxidasas, estos orgánulos de forma esférica. Prácticamente todas las enzimas oxidativas generan peróxido de hidrogeno (agua oxigenada) como producto de la reacción de oxidación (Ross, 2007).
Los peroxisomas son responsables de una serie de importantes reacciones metabólicas, entre las que se encuentran la síntesis deéteres de glicerol, el acortamiento de los ácidos grasos de cadena muy larga, para que las mitocondrias puedan oxidarlos completamente, y la oxidación de la cadena larga de colesterol, necesaria para la síntesis de ácidos biliares. La mayor parte de las células eucariotas de mamíferos, así como las de protozoos y plantas, tienen estos orgánulos; estos orgánulos son pequeños tienen un diámetroaproximado entre 0,3 y 1,5 mm, se identifican más de 50 enzimas en los peroxisomas. Estos peroxisomas tienen un papel esencial en la degradación de lípidos. (Devlin, 2006)
La reacción enzimática puede ser determinada por el método espectrofotométrico, midiendo el color desarrollado entre un peróxido aceptor de hidrógenos H2O2 y un fenol dador de hidrógenos , guayacol. (Valderrama, 2000).
Laperoxidasas se encuentran ampliamente distribuidas en el reino animal y vegetal y en su mayoría son hemoproteínas, su función es utilizar el peróxido de hidrogeno que sintetizan los organismos vivos con fines biosinteticos y de protección para oxidar alcoholes o aminas aromáticas. La peroxidasa de rábano blanco (HRP) es una de las más estudiadas desde el punto de vista espectroscópico y cinético.(Valderrama, 2000).

Objetivos
* Medir la actividad enzimática de las peroxidasas de células vegetales.
* Evaluar la actividad enzimática de las peroxidasas en función del tiempo.
* Determinar el efecto de la temperatura en la actividad de la peroxidasa.
* Evaluar cualitativamente el efecto de la temperatura en la actividad enzimática.
Hipótesis
Determinar mediante ciertas sustanciasy el uso correcto del espectrofotómetro y la centrifuga la concentración determinada o bien aproximada de peroxidasas contenidas en el rábano así como la reacción de este en diferentes temperaturas (frio, temperatura ambiente, calor) y también cómo reaccionan estos si se agrega una porción de agua oxigenada y peróxido.
Material
* Mortero
* 2 tubos para centrifuga
* Micropipetasy puntas de diferente volumen
* Celdas para espectrofotómetro
* 3 tubos de ensaye
* 1 caja de petri
Soluciones
* Amortiguador de fosfato 50 Mm, pH 6.6
* Amortiguador de fosfatos 50 Mm, pH8.5
Material proporcionado por los alumnos
* Peróxido de hidrogeno
* 3 rábanos de cambray frescos
* Una hoja para bisturí nueva o un cortador de precisión
Equipo* Centrifuga
* Espectrofotómetro
* Parrilla de calentamiento


DESARROLLO
1. OBTENCIÓN DE LA ENZIMA

2. MEDICÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

3. EFECTO DEL pH EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

4. EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD DE PEROXIDASA

RESULTADOS

Absorbancia a pH 6.6
Num. de veces cada 20 segundos | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 |12 | 13 | 14 | 15 |
Absorbancia | 0.079 | 0.081 | 0.095 | 0.108 | 0.113 | 0.110 | 0.101 | 0.065 | 0.057 | 0.060 | 0.062 | 0.073 | 0.082 | 0.093 | 0.099 |

Absorbancia a pH 8.5
Num. de veces cada 20 segundos | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 |
Absorbancia | 0.021 | 0.142 | 0.132 | 0.130 | 0.138 | 0.155 | 0.163 | 0.164 | 0.176 | 0.177 | 0.177 | 0.180 |...