Practicas enzimas

Práctica No. 1

DETERMINACIÓN DEL FACTOR DE CALIBRACION EN LAS DETERMINACIONES ENZIMATICAS
Objetivo
Obtener el factor de calibración para evaluar la actividad enzimática de una enzima de interés clínico.

Equipo, material y reactivos
1. Espectrofotómetro
2. Gradilla
3. Baño maría
4. Tubos de ensaye
5. Pipeta graduada de 5 mL
6. Micropipeta 10-50 µL
7. Aguadestilada
8. papel adsorvente
9. papel seda para limpiar cubetas de espectrofotómetro
10. Papel parafilm
11. Suero calibrador con valores asignados para enzimas
12. Reactivo para determinar actividad enzimática


Introducción
En las pruebas enzimáticas, la carencia o difícil acceso a estándares o calibradores enzimáticos, obliga al empleo de un factor de calibración, elcual es proporcionado por el fabricante del reactivo y aparecen en el inserto de los mismos. Antes de aplicar el factor en el trabajo rutinario debe evaluarse empleando un suero valorado y realizar la modificación del mismo en base al valor de actividad enzimática esperada. Del cálculo correcto de dicho factor dependerá la exactitud de los resultados. Este ajuste del factor leva implícitas lascaracterísticas del equipo empleado y de las condiciones de analíticas y ambientales de cada laboratorio.

En las mediciones de actividad enzimática, se emplean métodos cinéticos, el delta de absorvancia representa la aparición del producto o la desaparición del sustrato y es directamente proporcional tiempo, en este caso en factor de calibración será AEcal/∆Acal (AEcal=actividad enzimática delcalibrador, ∆Acal=delta de absorvancia del calibrador)

Desarrollo
1. Preparar el suero valorado y los reactivos de acuerdo a las instrucciones del fabricante comando en cuanta la cantidad de ensayos que se realizarán. (Se recomienda 3 repeticiones para evaluar el factor, y los problemas por duplicado.
2. Realizar cuidadosamente las determinaciones de una enzima, siguiendo lasinstrucciones del fabricante.

Informe
1. Calcular el factor del dividiendo la actividad del suero valorado, entre el delta de absorbancia.
2. Promediar los factores que sean semejantes y este será el factor para el instrumento. Recordar que si el equipo está bien calibrado y tiene la sensibilidad adecuada, el factor resultante deberá ser semejante al del inserto del reactivo.3. Calcular la actividad enzimática de los sueros problemas con el nuevo factor.

Cuestionario
1. ¿En que se fundamenta el análisis de enzimas para establecer un estado patológico de un órgano?
2. Menciona el grupo de enzimas que integran el perfil hepático, perfil cardiaco y perfil pancreático, y las patologías con las que se asocian.
3. ¿Qué enzimas son consideradascomo marcadores tumorales?
4. ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de la colinesterasa?
5. ¿Qué reacción catalizan cada una de las enzimas antes mencionadas?
6. ¿Qué pruebas no enzimáticos son importantes en el diagnostico de infarto agudo al miocardio?
7. ¿Qué son las isoenzimas, cuáles son las isoenzimas clínicamente importantes, y con qué patología se asocian?Práctica No. 2

EFECTO DE LA CONCENTRACION DE SUSTRATO SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA. DETERMINACION DE LA Vmax Y DE Km

Objetivo
Determinar la Vmax y la Km de una reacción enzimática, de una prueba enzimática de diagnóstico clínico.

Equipo, material y reactivos
1. Espectrofotómetro
2. papel higiénico
3. Gradilla
4. año maría
5. Tubos de ensaye
6. Pipetagraduada de 5 mL
7. Micropipeta 10-50 µL
8. Agua destilada
9. papel higiénico
10. Papel parafilm
11. Suero calibrador con valores asignados para enzimas
12. Reactivo para determinar actividad enzimática

Introducción
Si en una reacción enzimática se incrementa la concentración del sustrato y todas las demás condiciones permanecen constantes, la velocidad de la reacción se...