Practica microbiologia

PRACTICA 4º.
TINCION DE GRAM
Hay un método de tinción que se usa universalmente para distinguir a las bacterias en dos grandes grupos: se trata de la Tinción de Gram. Es una tinción diferencialque basa su distinción en la estructura diferente de la pared bacteriana de las bacterias Gram + (pared más gruesa y una sola capa de peptidoglucano) y de las Gram – (pared más delgada y dividida en dospartes). El procedimiento y sustancias son:
 Colorante básico cristal violeta o violeta de genciana. Es el primer colorante que se echa sobre el frotis previamente preparado. Es un coloranteselectivo que tiñe a todos los microorganismos. Se deja actuar durante 1 minuto y se lava con agua a continuación.

 Lugol. Producto compuesto de yodo y yoduro potásico. Es un mordiente, que intensificael cristal violeta haciendo que precipite, se deja actuar 1 minuto.

 Se lava con alcohol-acetona (al 50%), el tiempo justo para que no se arrastre el colorante 10-15 segundos. El alcohol retira elcolorante de las gram- debido a su diferente estructura de la pared celular (tamaños de los poros).

 Safranina. Colorante básico diferenciador. Tiñe a las bacterias gram-. Se deja actuar durante30-60 segundos y se lava con agua.

Como puede verse una vez finalizada la tinción las bacterias gram- estarán teñidas de color naranja-rosáceo y las gram+ de color violeta. Esto sirve paradiferenciarlas claramente al microscopio óptico o de luz.

Desarrollo práctico:
En primer lugar encendemos el mechero, ya que para realizar cualquier estudio de una muestra bacteriana, debemos usar latécnica aséptica para evitar la contaminación de la muestra.
Usamos una asa de siembra, aparato fundamental en la preparación de frotis y cultivos. La calentamos al rojo en el mechero y a continuacióncogemos una gota de agua el asa y la depositamos en el porta objetos que previamente habremos preparado. Volvemos a esterilizar el asa y con otra mano abrimos un tubo de ensayo tapado con un algodón...