Practica para nihidrina

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PRÁCTICA 2

CUANTIFICACIÓN DE AMINOACIDOS
(MÉTODO DE NINHIDRINA)

INTRODUCCIÓN

Hace muchos años, Ruhemann demostró que los aminoácidos y la ninhidrina reaccionan con gran sensibilidad paradar un compuesto púrpura, ahora conocido como púrpura de Ruhemann. El ensayo se basa en la reacción con ninhidrina del grupo amino de aminoácidos libres y de los grupos amino de la moléculaproteínica. Este proceso transcurre en varias etapas. En un principio, como resultado de la interacción del aminoácido con la ninhidrina se forma una base de Schiff. Luego ésta sufre un reagrupamiento, sedescarboxíla y se descompone en aldehído y aminodicetohidrindeno como se observa en la siguiente figura:

[pic]

El aminodicetohidrindeno se condensa con otra molécula de ninhidrina más y elcompuesto formado, al enolizar, toma un color violeta azul. Esta reacción se verifica según el esquema siguiente:

[pic]

En presencia de disolventes orgánicos (acetona, etanol etc.) en los cuales seprepara la disolución de ninhidrina, la reacción transcurre del modo siguiente:

[pic]

El producto de esta reacción contiene en su composición el radical R- del aminoácido inicial que provocadiferentes coloraciones (azul claro, violeta, roja y amarilla) en los compuestos que surgen en la reacción entre los aminoácidos y la ninhidrina. Aunque los aminoácidos forman el púrpura de Ruhemann bajocondiciones apropiadas (pH cercano a 5.0), los aminoácidos prolina e hidroxiprolina dan solamente un producto amarillo-café.

OBJETIVO
- Cuantificar el contenido de aminoácidos libres de unamuestra problema por el método de ninhidrina.
- Analizar las características fisicoquímicas de los aminoácidos y los fundamentos químicos en los que se basa la cuantificación de aminoácidos por elmétodo de ninhidrina.

|Material |Reactivos |
|10 tubos de ensayo de 15 X...
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