Practicas 1 y 2

Métodos básicos para el aislamiento e identificación de enterobacterias del agua

Introducción

Considerando que el estudio de las enfermedades transmisibles ocasionadas por microorganismos patógenos constituye el objeto de trasformación del módulo Procesos Celulares Fundamentales (PCF) del Tronco Común Divisional de Ciencias Biológicas y de la Salud (TCD de CBS), el objetivo del presentetexto es introducir a los alumnos de este módulo en el manejo de los métodos básicos empleados en el laboratorio de microbiología, tomando como modelo el aislamiento e identificación de enterobacterias a partir de muestras de aguas.
La metodología descrita consta de cuatro sesiones:
1. Preparación de muestras y cultivo en un medio selectivo
2. Aislamiento y Observación de lascaracterísticas macroscópicas y Microscópicas de las enterobacterias.
3. Pruebas bioquímicas para enterobacterias.
4. Identificación de las enterobacterias.
El objetivo de la Primera sesión es que el alumno aprenda a preparar la muestra y a sembrarla por estría cruzada para obtener colonias aisladas.
El objetivo de la segunda sesión es que el alumno aprenda a observar y determinar lascaracterísticas macroscópicas y microscópicas de las colonias aisladas. Así como obtener cultivos puros.
El objetivo de la tercera sesión es que el alumno conozca los fundamentos de las pruebas bioquímicas y realice las que se requieren para la identificar a las enterobacterias.
El objetivo de la cuarta sesión es que el alumno aprenda a interpretar las pruebas bioquímicas y finalmente identifique lasenterobacterias aisladas.
En este reporte al final incluimos un cuestionario el cual evaluara y reforzara los conocimientos obtenidos a lo largo de la realización de las prácticas de laboratorio

Consideraciones Teóricas
Enterobacteriaceae
Las Enterobacteriaceae son bacilos gramnegativos, distribuidos en la naturaleza de forma amplia. Se encuentran en el suelo, en el agua, sobre las plantasy como su nombre lo indica se encuentran dentro dl tracto intestinal de los seres humanos y de los animales. Se aíslan con mucha frecuencia de muestras clínicas.
La familia enterobacteriaceae está formada por aproximadamente 31 géneros y 139 especies y miles de serotipos. Algunos miembros de la familia siempre se asocian a enfermedades cuando se aíslan en el hombre, por ejemplo: Shigella,Salmonella, Yersinia pestis. Mientras que otros son miembros de la flora normal que producen infecciones oportunistas, por ejemplo: Escherichia coli, klebsiella pneuwmoniae, Proteus mirabilis.
Pasos para una identificación presuntiva
Los pasos a seguir para determinar si una bacteria aislada a partir de muestras de alguna fuente de contaminación, pueden pertenecer a la familiaEnterobacteriaceae, son los siguientes.
En primer lugar se obtiene una preparación teñida como Gram, que puede revelar bacilos y cocobacilos gramnegativos, cuyo tamaño vcaría de 0.5 a 2 um de ancho y de 2 a 4um de largo sin embargo, la diferenciación de especies no puede hacerse sobre la única base de la morfología con la tinción Gram.
El segundo paso es observar las características morfológicas de lacolonia cuando crece en un medio sólido. Típicamente, los miembros de este género producen colonias mucoides o secas relativamente grandes , dependiendo del medio de crecimiento es el color de las colonias. Por ejemplo, colonias color gris opaco en agar sangre sugiere cepas de Klebsiella pneumoniae; colonias rojas en el agar McConkey o que tienen brillo verde metálico sobre agar eosina azul demetileno (EMB), indican que la bacteria es capaz de formar ácido a partir de la lactosa presente en el medio. Sin embargo, la diferenciación de Enterobacteriaceae se basa en la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material genético del cromosoma bacteriano.
El tercer y definitivo paso para la identificación de los miembros de Enterobacteriaceae requieren un conjunto de...