Practicas De Laboratorio

*Determinación de hemoglobina (Hb)
Fundamento:
Es una proteína conjugada de color rojo integrantes de los eritrocitos entre un 31-34%.
Existen varios métodos para determinación como hematina ácida, hematina alcalina, oxihemoglobina, carboxihemoglobina y cianometahemoglobina; éste último es el de elección por que es estable en soluciones diluidas, porque existen en el mercado estándares decianometahemoglobina y porque las lecturas se pueden hacer en espectrofotómetro de uso común y corriente.
La sangre se hemoliza por agregado de un agente densoactivo, con el ferrocianuro de potasio se oxidan el átomo de fierro de ferroso a férrico para producir metahemoglobina. El cianuro de potasio estabiliza la metahemoglobina pasando de cianometahemoglobina. La cloración producida es directamenteproporcional a la concentración de hemoglobina presente.

Material:
•Tubos de ensayo de 13 x 100 ml
•Pipetas de 1ml
•Pipetas de Salí
•Boquillas
•Gradillas
•Gasa
•Celdas para espectrofotómetro
•Sangre capilar o venosa con anticoagulante.

Reactivos:
•EDTA al 10 % (.07 ml por .5 ml de sangre)
•Reactivo DE Drabkin:
-ferrocianuro de potasio

-cianuro de potasio
-bicarbonato depotasio
•Solución estándar de cianometahemoglobina.

Procedimiento:

1.- Colocar en un tubo de ensayo 5 ml de reactivo de Drabkin
2.- Homogeneizar bien la sangre
3.- Llenar en sangre hasta la marca de la pipeta de Sahli
4.-Mezclar la sangre con el disolvente
5.- Dejar Reposar 10 min. Para la formación de cianometahemoglobina
6.- leer a 540 nanómetros en el espectrofotómetro contra un blancode reactivo.
7.- comparar con la curva calibrada de estándares.

Valores de referencia:
Mujeres: 12 -14 gr/dl
Mujeres embarazadas: 11-14 gr/dl
Hombres: 13-19gr/dl
Recién nacidos: 13.19gr/dl

* DETERMINACIÓN del hematocrito
Es sencillo y exacto y es importante para determinar los índices eritrocitarios

Fundamento:
El hematocrito mide el porcentaje del volumen de sangre total peroocupado solamente por los eritrocitos

Material (macrohematocrito)
•Tubo de Wintrobe que tiene 11.5 cm de largo x 3 mm de luz (hueco). Para el micro se usa el tubo capilar)
•Pipeta Pasteur larga o pipeta para llenado de hematocrito
•Centrífuga
•Sangre capilar (micro) o venosa (macro) con anticoagulante

•Reactivos

Procedimiento:
1.- Homogeneizar perfectamente la sangre haciendo girar eltubo
2.- Utilizando la pipeta Pasteur se llena de sangre el tubo de Wintrobe exactamente hasta 10, no deben quedar burbujas de aire en el tubo
3.-Centrífuga a 3600 rev x min. Durante 30 min.
4.- Leer en la línea de separación de la columna de glóbulos rojos sabiendo que cada raya tiene 1%

Valores de referencia:
H= 47 +- 2.5
M= 42+- 2.5

*CUENTA ERITROCITARIA

Introducción:

Cuando laeritropoyésis tiene lugar normalmente, su resultado final es la producción de una célula-eritrocito perfectamente diferenciada y apta para su función principal que es la de transportar oxígeno y CO2 . La falta de núcleo le confiere la virtud de acarrear el oxígeno sin consumir prácticamente nada de el; su forma bicóncava es la que mejor se presta para afrontar la hemólisis; su membrana no admite lasalida de hemoglobina.

Fundamento teórico:

Consiste en diluir la sangre con el líquido de Hayem en una proporción exacta y luego examinar al microscopio una pequeña cantidad de la muestra colocada en la cámara de Neubauer, contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de la cámara y mediante una operación matemática se obtiene la cifra total.

Material:
•Tubos deensayo de 13x100mm
•pipetas de Thomas para glóbulos rojos
•cámara de Neubauer
•boquillas
•microscopio
•gasa
•gradilla
•sangre capilar o venosa con anticoagulante
•Cámara de Neubauer

Reactivos:
•EDTA (sal di sódica) al 10%
•Líquido de Hayem:
Cloruro de mercurio 0.5 g
Cloruro de sodio 1.0g
Sulfato de sodio 5.0g
Agua destilada 100ml

Procedimiento:
Las pipetas están constituidas por...