Preparación De Extendidos

PREPARACIÓN DE EXTENDIDOS

* Resumen

“La tinción de Gram es una tinción diferencial que según como reaccionen a esa tinción las bacterias, éstas se pueden dividir en dos grupos: Gram-positivas y Gram-negativas. Después de la coloración, las bacterias Gram-positivas aparecen de color violeta-púrpura, debido a que retienen el primer colorante (violeta-cristal). Por el contrario, lasGram-negativas aparecen coloreadas de rojo o rosa, puesto que al perder el primer colorante, se tiñen con el segundo (safranina o fuchsina básica). Estas diferentes maneras de reaccionar a la tinción de Gram se deben a las diferencias en la estructura de la pared celular de las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Las primeras poseen una gruesa pared celular compuesta fundamentalmente de un solotipo de molécula, peptidoglucano, mientras que la pared celular de las Gram-negativas es mucho más fina y posee una estructura de capas múltiples bastante compleja de peptidoglucano y lipopolisacáridos. Puede decirse que la tinción de Gram es un fenómeno físico causado por la contracción de los poros de la pared celular tras el proceso de deshidratación por el agente colorante (etanol, acetona), loque evita la salida del colorante primario en las bacterias Gram-positivas” (2) Aplicando el conocimiento de lo anterior en la práctica se pretende hacer una clara diferenciación entre las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, con ayuda de algunos implementos que permitirán la satisfactoria realización de la práctica.

* Introducción

“En 1884 Christian Gram descubrió empíricamenteuna tinción diferencial de gran valor práctico, que con posterioridad se denominó tinción de Gram. Existen muchas modificaciones de esta tinción, pero en todos los casos se realizan los siguientes pasos esenciales: la extensión de células, fijadas por calor sobre un porta, se tiñe de modo sucesivo con un colorante básico, el violeta de cristal, y con una disolución diluida en yodo. La preparaciónse trata luego brevemente con un disolvente orgánico (alcohol o acetona). Las bacterias Gram-positivas resisten la decoloración y permanecen teñidas de un color azul obscuro-negro; las bacterias Gram-negativas son rápida y completamente decoloradas. Al realizar este procedimiento de tinción es esencial examinar células en crecimiento, ya que ciertas bacterias Gram-positivas (por ejemplo, Bacillusspp.) pierden rápidamente la capacidad de retener el complejo violeta cristal-yodo una vez que cesa el crecimiento activo. El resultado de la tinción de Gram está, por lo tanto, condicionado en cierta medida al estado fisiológico de la célula, pero también se corresponde con diferencias fundamentales en la composición química y en la ultraestructura de las paredes celulares de las eubacterias.
Losanálisis químicos muestran que las paredes de las bacterias gran-positivas contienen peptidoglicano como componente mayoritario junto a polisacáridos asociados y una clase especial de polímeros, los ácidos teicoicos. La capa más interna de las paredes de las bacterias Gram-negativas es una capa muy fina de peptidoglicano y la capa es una membrana, denominada membrana externa.” (1) Es así como enel presente informe se hace un detallado análisis de la tinción de Gram y su influencia en la determinación de la estructura de las bacterias.

* Objetivos

* Fijar muestras de bacterias para poder reconocer su composición y morfología.

* Identificar las técnicas de coloración más comunes para analizar la estructura de las bacterias.

* Diferenciar las bacterias Grampositivas y las bacterias Gram negativas con ayuda de las técnicas de coloración y por medio de la observación en el microscopio.

* Metodología

1. Se le agregó una gota de agua destilada a un portaobjetos.

2. Se calentó el asa de inoculación para esterilizarla e inhibir la contaminación.

3. Con el asa esterilizada, se procedió a tomar una muestra de la bacteria Escherichia coli y...