Preparaciones Y Coloraciones Microscopicas

PRÁCTICA Nº 02: PREPARACIONES Y COLORACIONES MICROSCOPICAS

I. PREPARADOS

A. PREPARADOS EN FRESCO

1. Colocar en una lamina portaobjeto una gota de una muestra liquida (Ejm. Agua estancada).
2. Colocarle el cubre objetos con cuidado, tocando el borde del mismo con líquido (muestra) y dejando caer suavemente, para evitar la formación de burbujas.
3. Observar en el microscopioóptico usando los objetivos en seco (empezando con el de menor aumento).
4. Verificar La importancia de los tornillos macro y micrométrico y regulando la iluminación usando el diafragma.



















B. PREPARADOS EN SECO


Técnica de extensión de una muestra sobre portaobjetos


1. Tomar la muestra de la mucosa labial (usando un hisopo estéril), o sarrodentario (usando un mondadientes)


2. Preparar el Frotis extendido de la muestra (mucosa labial o sarro dentario): Rotar el hisopo con muestra sobre una lámina portaobjetos con movimientos suaves. La palabra frotis viene de frotar, o bien “untar”. También se puede usar el asa de Koll para el extendido según lo indique la guía.

3. Dejar secar al aire o fijar concalor moderado utilizando el mechero (según si lo indicara la guía practica), procurando no quemar la muestra.

[pic] [pic]


II. COLORACIONES

A. COLORACION SIMPLE

• De los preparados en seco (mucosa labial), se procederá a colorear una muestra con un colorante acido y otra con colorante básico.


[pic]


B. COLORACION GRAM


1. Tomar el frotis en seco:portaobjetos con extendido de la muestra (sarro dentario, pus o un cultivo bacteriano).

2. Colorear con el primer colorante de la tinción: Cristal Violeta y dejarlo en reposo de a 1 a 2 minutos.

3. eliminar el exceso de colorante sin lavar la lamina

4. Agregar la Solución de Lugol durante 1 o 2 minuto. Esta solución es el Mordente, es decir, el fijador que va a conseguir que elCristal Violeta se mantenga (en caso de haberse unido a la pared de la bacteria grampositiva, pues la gramnegativa no lo va a retener, a pesar del mordente).

5. Agregar unas gotas del decolorante de Alcohol-Acetona, hasta no arrastrar más colorante de cristal violeta, (aproximadamente 10 segundos).

6. Lavar el preparado con agua destilada.

7. Agregar solución colorante deSafranina durante 1 minuto. Este es un colorante de contraste, que es de color rojo y dejarlo en reposo por espacio de 1 a 2 minutos.



8. Lavar nuevamente con agua destilada, dejar escurrir y secar al aire o al calor moderado.

9. Observar al microscopio óptico con objetivo de inmersión e identifique a las bacterias grampositiva, pues la gramnegativa.




BacteriasGram positivas Bacterias Gram negativos

Ejm. Bacteria: Stafylococcus aureus Ejm. Bacteria: Escherichia coli

(Cocos toman el color del cristal violeta) (Bacilos toman el color de la safranina)














III. FROTIS DE SANGRE Y COLORACION NEUTRA

Para realizar el frotis seguir los siguientes pasos:1. Desinfectar con un algodón embebido con alcohol la zona a tomar la muestra (Parte lateral de la yema de uno de los dedos), Se coge entre el pulgar y el índice y se hace una punción rápida y penetrante a través de la piel de la punta del dedo con una lanceta estéril, posteriormente recoger una pequeña gota de sangre y depositarla a 1cm del extremo de una lamina porta objetos totalmente limpios.2. Extender mediante otro portaobjetos de la manera siguiente: poner el portaobjetos en contacto con la gota, que en principio se alargará en una línea en la zona de contacto de las dos laminas portas. Hacer deslizar el portaobjetos esmerilado sobre la porta soporte en dirección opuesta a la de la gota de sangre; ésta, por tensión superficial, se extiende formando una lámina muy...