Preparación Y Esterilización De Medios De Cultivo

PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Rubén Darío Arredondo Jiménez

INTRODUCCIÓN
Un método fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Haymuchos medios de cultivo especiales que permiten identificar más claramente a una bacteria, por ejemplo: algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si está presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azúcares especiales que sólo pueden utilizar algunas bacterias. En algunosmedios se añaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado.
Los requerimientos necesarios para un cultivo de bacterias son:
• Medio de carbono.
• Presencia o ausencia de oxigeno.
• Atmósfera adecuada.
• Agar-agar.
Para un cultivo adecuado de bacterias y microrganismos, se utiliza el agar, un gel coloidal formado por hidratos de carbono, deextendido uso comercial, y que proviene de las paredes celulares de varias especies de algas rojas.
Cada tipo de agar debe cumplir con los requerimientos necesarios para que se desarrollen las bacterias:
Fuente de energía.- Las bacterias pueden ser fotótrofas o quimiotótrofas. Las fototótrofas absorben energía del sol y las quimiotótrofas de compuestos orgánicos.
Fuente de carbono.
Fuente denitrógeno.- Las bacterias pueden obtener el nitrógeno atmosférico a través de las proteínas o por la degradación de aminoácidos o péptidos.
Azufre y fosfatos.- La obtienen como elemento(S), y como fosfatos en sales (P).
Vitaminas.
Agua.- Medio de transporte que permite una mejor absorción de los nutrimentos.
También requiere de los requerimientos nutricionales óptimos para su desarrollo:Proteínas.- Se suministran generalmente peptonas, que se encuentran disponibles en el comercio, preparadas por digestión parcial de carne con enzimas peptídicas; consisten en polipéptidos, dipéptidos y aminoácidos.
Carbohidratos.- Sumistran carbono para la síntesis, y además su fermentación libera energía utilizable en el metabolismo.
Sales minerales.- Elementos como K, Ca, Na, etc.; también sonrequeridas por algunas bacterias en su desarrollo.
De acuerdo a las especificaciones de cada medio pueden clasificarse en:
Medios básicos.- Son los medios más simples, contienen extracto de carne, peptona, sal y agua. El extracto o infusión de carne proporciona aminoácidos, vitaminas, sales y pequeñas cantidades de elementos como C, N y otros elementos. Ejemplo: Agar de infusión, Agarcerebro-corazón.
Medios enriquecidos.- Son aquellos medios básicos que han sido complementados con líquidos corporales, vitaminas específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes. Ejemplo: Agar sangre y agar chocolate.
Medios selectivos.- Son medios de agar básico, enriquecidos agregándole ciertos reactivos que impiden el crecimiento de la mayoría de las bacterias y permitiendo el desarrollo de unascuantas. Ejemplo: Agar con sangre y bilis al 40%, Agar sal y manitol.
Medios diferenciales.- Son medios a los que se les han agregado ciertos que reaccionan con un tipo específico de bacterias. Ejemplo: Agar de McConckey, Agar EMB, Agar XLD.
Medios de enriquecimiento.- Son los medios que contienen alguna sustancia inhibidora por lo que se crea un medio favorable para límites mas estrechos debacterias. Ejemplo: Agar S.S., Agar de Lowensten-Jensen.
Medios especiales.- Son los medios para comprobar una o más características bioquímicas. Ejemplo: Agar TSI, Agar CIT, Agar LIA, Agar MIO.
Para la preparación de los medios se debe tener en cuenta los siguientes aspectos:
• Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisicoquímica adecuada.
• Utilizar...