Producción de amilasas fúngicas

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PRODUCCIÓN DE AMILASAS FÚNGICAS
Olivares M1, Pacherres Z2, Marcelo C2, Mannucci M2, Mendoza A2, Mezarina M2, Padilla J2, Novoa H2, Julián E2, Novoa J3
1. Departamento Académico de Química Biológica y Fisiología Animal de la Facultad de Ciencias Biológicas-UNT. eolivares@unitru.edu.pe
2. Estudiantes del III Ciclo (2010-I) de Microbiología y Parasitología-UNT.
3. Biólogo-Microbiólogo.Egresado de la Facultad de Ciencias Biológicas-UNT.
Palabras clave: Producción, amilasas fúngicas
INTRODUCCION
La producción de enzimas se refiere a la “producción” celular de la enzima, a la recuperación o aislamiento de la enzima, y a la purificación de la enzima1,2,3,4.
Las amilasas hidrolizan el almidón8, originando productos a base de dextrinas, maltosa y glucosa, los cuales poseen unagran relevancia para algunas operaciones y procesos industriales9,10.11,12,13,14,15,16,17. Comúnmente se hallan en animales y en plantas; sin embargo, para fines industriales, las más usadas son las de origen bacteriano o fúngico18. La importancia de producir amilasas fúngicas está dirigida esencialmente a la industria de alimentos y a la producción de biocombustibles, siendo también bastante útilespara la industria textil19. Son escasos los trabajos actuales alusivos al tema, por ello se plantea: ¿A partir de que fuentes se pueden aislar hongos filamentosos productores de amilasa?. Conociendo que los hongos filamentosos ambientales crecen bien en condiciones naturales, entonces pueden ser utilizados para producir una buena cantidad de amilasa.
OBJETIVO
Evaluar y aislar hongosfilamentosos ambientales que sean buenos productores de amilasa.
MATERIAL Y MÉTODOS
1. REACTIVACION Y AISLAMIENTO DE LOS CULTIVOS DE A. niger: A. niger LQBa fue reactivado de un cultivo stock puro. A. niger LMa fue aislado del aire del Laboratorio de Micología de la Facultad de CC.BB-UNT. A. niger Sf se aisló a partir del filtrado de suelo del jardín de la Facultad de CC.BB. A. niger Le, A. niger Ae, yPenicillum sp Pe fueron aislados de hojas de libro, arroz y pan enmohecidos.

2. EVALUACIÓN CUALITATIVA DE LA PRODUCCIÓN DE AMILASAS: Las colonias que mas produjeron amilasa se detectaron observando el halo de degradación del almidón (agar almidón al 1% y 0.5%) al adicionar lugol.

3. PRODUCCIÓN Y EXTRACCIÓN DE LAS AMILASAS: En medios sólidos (salvado de trigo), en medios líquidos(filtrado de caldo salvado de trigo–choclo), y en medio semisólido. Las amilasas de los medios sólidos y semisólidos se extrajeron por filtración, luego de adicionarles buffer acetato. Las amilasas de los medios líquidos fueron extraídas por filtración y centrifugación. Los filtrados fueron congelados.

4. EVALUACIÓN CUANTITATIVA DE LA PRODUCCIÓN DE AMILASAS: Se evaluó la actividad amilásica segúnel método de Street-Close3, y según Pichén23.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
1. EVALUACIÓN CUANTITATIVA DE LA PRODUCCIÓN DE AMILASAS: En la tabla 1 se observa que A. niger LMa presenta mayor producción de amilasa, en medio sólido como en medio líquido. Sin embargo, según el método de Street-Close, se observa que en medio sólido no existiría mayor diferencia significativa entre los cultivos A. nigerLMa y A. niger Sf. Al contrario, según la técnica reportada por Pichén23, si existiría diferencia significativa entre los tres cultivos en medio sólido.
Tabla 1. Unidades de amilasa Street-Close y UA/dL producidos por los cultivos aislados de Aspergillus niger, creciendo en medio sólido, en medio semisólido y en medio lÍquido.

CULTIVO | UNIDADES STREET-CLOSE (USC/100 mL) | UA/dL |
A.niger LQBa (medio líquido) | 3.25 | 103 |
A. niger LMa (medio sólido) | 50.40 | 963 |
A. niger LMa (medio líquido) | 8.45 | 168 |
A. niger Sf (medio sólido) | 47.35 | 819 |
A. niger Sf (medio semisólido) | 15.75 | 213 |
A. niger Sf (medio líquido) | 7.60 | 138 |
A. niger Le (medio sólido) | 27.70 | 584 |
A. niger Le (medio líquido) |...
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