proteinas

Prácticas de Bioquímica I

Práctica: Reacciones Generales de aminoácidos y proteínas

REACCIONES GENERALES DE
CARACTERIZACIÓN DE AMINOÁCIDOS Y
PROTEÍNAS.
Objetivos
Al terminar esta práctica el estudiante estará en capacidad de:
-

Aplicar pruebas químicas para la determinación cualitativa de aminoácidos.

-

Conocer la importancia de los grupos R en la determinación cualitativa delos
aminoácidos.

-

Emplear reacciones específicas para la caracterización de proteínas.

Introducción
Los aminoácidos son las unidades estructurales más simples (monómeros) que
componen la estructura de las proteínas; están constituidos por un grupo amino (NH2
o NH3+), un grupo carboxilo (COOH o COO-) unido al carbono 2 de la molécula, un
átomo de hidrógeno y una cadena radicalconocida también como grupo R. Esta
última es específica para cada aminoácido y contribuyen a la identificación de los
mismos.
La presencia de estos grupos químicos en la estructura de los aminoácidos es
lo que determina que estas moléculas intervengan en un gran número de reacciones
químicas.
Las reacciones pueden ir de lo general, como es el caso de la reacción de la ninhidrina
o la de Biuret,hasta lo muy específico como veremos en el desarrollo de este trabajo
práctico.

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Prácticas de Bioquímica I

Práctica: Reacciones Generales de aminoácidos y proteínas

MATERIALES Y REACTIVOS
-

Tubos de ensayo

-

Pipetas graduadas de 1, 2 y 5 mL

-

Baños de María

-Goteros

-

Pinzas para tubo de ensayo

-

Cilindro graduado

-

Soluciones al 0,2% de los aminoácidos disponibles en el laboratorio.

-

Solución de albúmina al 0,5 %

-

Reactivo de ninhidrina: preparada al 0,1 % en etanol

-

Acetato de plomo al 10 %

-

NaOCl al 10 %

-

NaOH al 30 %

-

HNO3 Concentrado

-

Reactivo de Millon: disolver 40 g demercurio metálico en 57 mL de HNO3 y
aforar con cuidado a 100 mL con agua destilada

-

Reactivo de Biuret: puede presentarse como una mezcla, combinando
previamente sulfato de cobre e hidróxido de sodio. En dicho caso se usarán 0,5
mL de dicha mezcla

Reacción de la Ninhidrina
Consiste en la reacción del grupo amino y/o carboxilo libre de los aminoácidos
y las proteínas con la ninhidrina.Esta es una de las reacciones de uso frecuente en el
estudio químico de los aminoácidos, péptidos y proteínas. Se fundamenta en la
reacción de la ninhidrina frente a las moléculas que poseen funciones amínicas y
carboxílicas libres, formándose un compuesto final de color violáceo.
En esta reacción, cada equivalente de aminoácido reacciona con dos
equivalentes de ninhidrina. Aunque la reacción dela ninhidrina con aminoácidos y
proteínas es de fácil ejecución, esta lleva implícita varias etapas:

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Práctica: Reacciones Generales de aminoácidos y proteínas

1. Condensación de la Ninhidrina con el aminoácido:
O

O
OH

H2O

O
H3N+ CHC OR
OO

NCHC OH

aminoácido

OH
O

O

R

O

O

2. Formación de la base de Schiff:
O

O-

R

N CHR

NCHC OH
O

O

+ CO2

O

3. Formación del dicetohidrindeno:
O-

ON CHR

H2O

NH2

+ CHO R

O

O

4. Condensación del amino-dicetohidrindeno con otra molécula de ninhidrina:
O

ONH2
O

O

ON

+ O
O

O

O

El último compuesto en esta cadenade reacciones es de color azul violáceo, e
indica la presencia de grupos carboxilo y/o amino libres en la muestra analizada.
Experimento 1
Prueba de la Ninhidrina.
En tres tubos de ensayo rotulados (1, 2 y 3) coloque 2 mL de aminoácido (tubo 1), de
proteína (tubo 2) y de compuesto desconocido (tubo 3). Agregue a cada tubo 10 gotas
de reactivo de ninhidrina y agite suavemente.
Coloque los...