PROTOCOLO LABORATORIO NEUROCIENCIAS

PROTOCOLO LABORATORIO NEUROCIENCIAS

PBS
PO4HNa2 . 12 H2O : 17.5 gr en 405 mL H2O destilada
PO4H2Na . 2 H2O : 0.344 gr en 95 mL H2O destilada
CLNa : 16 grpH 7.8
CLK : 0.4 gr
H2O destilada : hasta 2000 mL

METANOL
6.66 mL H2O2 al 30%
13.34 mL metanol
*20 minutos en recipientes tapados en oscuridad
MEZCLA
1 mLsuero normal de caballo
0.3 mL Tritón X- 100 = 300 μL
98.7 mL PBS
TRIS – CIH
1800 mL de H2O destilada
24.22 gr TRIS
140 mL HCL 0.1 N pH 7.6 Ajustar
Ajustar hasta 2000 mL
*Botella 1N10 mL botella en 90 mL H2O destilada

PERFUSION
Hidrato de cloral :
0.3 gr H. de cloral / Kg
Inyectar 0.5 mL / cada 100 gr
Solución salina :
0.9 gr CLNa en 100 mL H2O destilada
0.1 mL heparina10 gr / L metabisulfito
FIJADOR
500 mL H2O destilada (calentar hasta 60°C)
Añadir 40 gr PAF poco a poco
Enfríar
*Añadir NaOH si queda opaco
Añadir 500 mL Sorensen 0.15 M
Filtrar
Sorensen:
PO4HNa2 . 12 H2O : 21.665 gr / 500 mL H2O destilada
PO4H2Na . 2 H2O : 2.0475 gr / 500 mL H2O destilada
*Si fuera PO4H2Na . H2O : 0.344 gr en 95 mL H2O destilada
1.81 en500 mL H2O destilada



SACAROSA
25 gr Sacarosa / 100 mL PBS

DAB
0.0166 gr DAB 0.0249 gr
50 mL TRIS 75 mL
25 μL H2O2 comercial 37.5 Μl

PORTAS GELATINADOS

Lavar portas en alcohol 96% -Dejar secar
Calentar a 60° C 1000 mL H2O destilada
10 gr gelatina
8.81 gr Kalium Krom (III) Sulfat x 12 H2O
Enfríar a 40° C y filtrar
Introducir 2 – 3 min los portas en la solución
Secar en papelfiltro
Dejar portas una noche en la estufa 37-40° C
Enfriar y guardar los portas a -20° C




MEDIO MONTAJE
PBS – glicerol : 1:3 1:1 (15 mL x 15 mL)
Fluorescencia : 50 mg P- fenilenediamina en 5 mLPBS
Añadir una pipeta pasteur de tampón
100 mL : 5.3 gr CO3Na2 en 100 mL (0.5 M) 10 mL
4.5 gr CO3HNa en 100 mL (0.5 mL) 90mL
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