Protocolo Pr Ctico CBCC5 2015

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
FACULTAD DE MEDICINA

ESTUDIO DE LAS MODIFICACIONES OXIDATIVAS
DE LA LIPOPROTEINA DE BAJA DENSIDAD (LDL):
ANALISIS DE LA OXIDACION DEL COMPONENTE
LIPIDICO Y PROTEICO.

CBCC5-2015
Elaborado por: Dr. Andrés Trostchansky
Profesor Adjunto del Departamento de Bioquímica

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Introducción.
Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) son partículas esféricas con un
diámetro de19-23 nm, constituyendo la población de lipoproteínas que poseen
una densidad entre 1,019 y 1,063 g/ml. La hipótesis oxidativa de la
aterosclerosis postula que las placas de ateroma se forman a partir de células
(principalmente macrófagos y musculares lisas) cargadas con lípidos (ésteres
de colesterol), como consecuencia de modificaciones oxidativas de la LDL (LDL
oxidada u ox-LDL). Las LDL soninternalizadas en las células a través del
receptor normal de LDL (receptor apoE/apoB) por endocitosis mediada por
receptor. Este es un proceso regulado a la baja que impide la entrada excesiva
de lipoproteínas a las células; además su regulación está coordinada con la del
metabolismo del coleterol impidiendo la acumulación nociva de este lípido. A
diferencia de la LDL nativa, la ox-LDL es reconocidapor receptores
barrenderos o “scavenger” a nivel de las células endoteliales y musculares
lisas, monocitos y macrófagos por un proceso no regulado. Mientras la LDL es
oxidada, la lipoproteína pierde su habilidad de ser reconocida por el receptor de
la LDL incrementándose a su vez la afinidad por el receptor scavenger. Durante
la oxidación de la LDL a una forma reconocida por los receptoresscavenger,
existe una disminución de la cantidad de grupos - amino libres de los residuos
de lisina de las LDL lo cual explica el cambio en la especificidad del receptor.
La acumulación intracelular de lípidos, combinada con la disminución de la
degradación de los lípidos oxidados, resulta en la conversión de los
macrófagos en células espumosas formándose la estría grasa que constituye
una acumulaciónfocal de lípidos en la íntima arterial y que representa la lesión
más precoz del proceso.
Estructura de la LDL.
La LDL humana se define como la población de lipoproteínas que pueden ser
aisladas por ultracentrifugación en gradiente de densidad, con un rango de
densidad entre 1,019 a 1,063 g/ml.
Características de las principales lipoproteínas del plasma humano.
Densidad
(g/ml)
MovilidadElectroforética
Diámetro
(nm)
Peso molecular
(daltons)
Relación
Lípido/ Proteína
Lípidos más
Abundantes
Principales
Apoproteínas

Quilomicrones
 0,95

VLDL
0,95 -1,006

Origen

Pre- beta

 70

25 - 70

0,4- 30
9
 10
99 : 1
TG
Exógenos
A-I, B-48,
C-I,C-II, CIII

IDL
1,006 - 1,019

LDL
1,019 - 1,063

HDL
1,063 - 1,210

Beta

Alfa

22 - 24

19 – 23

4 - 10

5 - 10
6
 10

4-5
6
 10

1,8 - 2,8
6
 10

1,8 -3,6
5
 10

90 : 10

85 : 15

80 : 20

50 : 50

Entre beta y pre
- beta

TG endóge-nos TG endógenos
y Ce
B-100, C-I,
B- 100, E
C-II,C-III,E

CE y FC

Phl y CE

B-100

A-I, A-II

TG: triacilglicéridos; CE: ésteres de colesterol; FC: colesterol libre; Phl: fosfolípidos

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Como muestra la tabla, las moléculas de LDL son grandes partículas esféricas
con un diámetro de 19 - 23 nm y un peso molecularentre 1,8 y 2,8 millones.
Tomando 2,5 millones como un valor promedio del peso molecular de la
lipoproteína cada partícula contiene alrededor de 1600 moléculas de ésteres de
colesterol y 170 moléculas de triglicéridos que juntos forman un core central
lipofílico. Este core central se encuentra rodeado por una monocapa formada
principalmente por unas 700 moléculas de fosfolípidos (particularmentefosfatidilcolina) y 600 moléculas de colesterol libre. Las cabezas polares de los
fosfolípidos se encuentran en la superficie de la partícula de LDL contribuyendo
a su solubilidad en la fase acuosa. El número total de moléculas de ácidos
grasos unidos a las diferentes clases de lípidos de la LDL es en promedio de
2700. De estos, alrededor del 50 % son ácidos grasos poliinsaturados,
principalmente...