Pruebas Bioquímicas De iDentificación De Bacterias

PRUEBAS BIOQUÍMICAS DE IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
Sirven para la identificación de características metabólicas, movimiento, enzimas y productos del metabolismo.
KLIGER HIERRO AGAR
Medio de cultivo rojo sólido usado en microbiología de alimentos para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa y lactosa, y a la producción de ácido sulfhídrico. Contiene:Nutrientes: Peptona de carne y tripteína. CH Fermentables: Lactosa y glucosa. Producción de SH2: Tiosulfato de sodio. Fuente de iones Fe3: Citrato de hierro y amonio. Indicador de pH: Rojo de fenol
FUNDAMENTO: Por fermentación de la lactosa por B galactosidasa, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodiose reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
INCUBACIÓN: A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados

1-Pico alcalino/fondo ácido (rojo/amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico ácido/fondo ácido (amarillo/amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.3-Pico alcalino/fondo alcalino (rojo/rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
SIMMONS CITRATO AGAR
Medio verde semisólido utilizado para la diferenciación de enterobacterias, en base a lacapacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía.
FUNDAMENTO: El fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul debromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente decarbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa.
Resultados
-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

Microorganismo Citrato permeasa Color del medio
Klebsiellapneumoniae Positivo Azul
S. typhimurium Positivo Azul
E. coli Negativo Verde
S. flexneri Negativo Verde

ÚREA
Medio amarillo, sólido, utilizado para diferenciar microrganismos en base a la actividad ureásica.
Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.
FUNDAMENTO: La tripteína y la glucosa, aportan los nutrientes parael desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el rojo de fenol es el indicador de pH.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando amoníaco y dióxido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo. En este medio, la fermentación de la glucosa activa la enzima ureasa,acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.
INCUBACIÓN
En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 °C.
INTERPRETACIÓN: (+) Rosado (-) Amarillo
Microorganismo Actividad ureásica Color del medio
Proteus mirabilis Positiva Rojo-Rosado
K. pneumoniae Positiva débil Rojo-Rosado
Escherichia coli...