pruebas bioquimicas

Secciones Incluidas en instrucción de trabajo técnico
1. Objetivo
2. Alcance
3. Responsabilidad y autoridad
4. Definiciones, abreviaturas y/o siglas
5. Referencias bibliográficas
6. Fundamentos de esta Instrucción
7. Descripción del procedimiento
7.1. Equipos y Materiales
7.2. Medios de Cultivo y Reactivos
7.3. Purificación de Cultivos
7.4. Prueba de Ureasa (convencional)
7.5. Pruebade Lisina Descarboxilasa
7.6. Prueba con Caldo Rojo Fenol – Dulcitol
7.7. Pruebas al Cultivo Incubado en Caldo Triptona o (Triptófano)
7.8. Prueba con Antisuero Flagelar “H”
7.9. Prueba Serológica de Spicer-Edwards
7.10. Pruebas con Antisuero Polivalente “O”
7.11. Prueba de Identificación con Antisueros del Grupo Somático “O”
7.12. Pruebas Bioquímicas Adicionales
8. Expresión deResultados
9. Elaboración, Revisión y Aprobación de este Documento
10. Control de Cambios de este Documento
1. Objetivo
Esta instrucción describe las pruebas bioquímicas y de serotipificación para la identificación de la bacteria Salmonella spp en alimentos
2. Alcance
Esta instrucción se aplica a muestras de productos cárnicos: crudos, procesados, embutidos, congelados y secos.
3. Responsabilidad yautoridad
El Jefe del Área de Microbiología de Alimentos: debe velar por el cumplimiento de las instrucciones establecidas en este procedimiento.
Los Analistas: deben realizar el ensayo según lo descrito en este procedimiento.
4. Definiciones, abreviaturas y/o siglas
No Aplica
5. Referencias bibliográficas
APHA. Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, FourthEdition, Cap. 37
AOAC INTERNATIONAL. 1995. Official Methods of Analysis, 16th ed., Secc. 967.25-967.28, 978.29, 989.12, 991.13, and 994.04. AOAC INTERNATIONAL, Arlington, VA.
Ewing, W.H. Edwards and Ewing's Identification of Enterobacteriacae, 4th ed. 1986, Elsevier, New York.
USDA-FSIS – MLG 4.05 – Isolation And Identification of Salmonella From Meat, Poultry, Pasteurized Egg and Catfish Products,USDA Laboratory QA/QC Division, 950 College Station Road Athens, GA 30605, http://www.fsis.usda.gov/pdf/mlg_4_05.pdf
Insert No. 15983 – Salmonella Antisera for in vitro diagnostic use, Statens Serum Institute, Denmark, December 2005
Vassiliadis, P. 1983. The Rappaport-Vassiliadis (RV) enrichment medium for the isolation of Salmonellas: an overview. J. Appl. Bacterial. 54:69-76
MT-5.2-03 –Manual de Bioseguridad y Seguridad para el Personal del Laboratorio, Versión 1, Revisión 01, 2013, Laboratorio de Diagnóstico Veterinario y Microbiología de Alimentos (LCDVMA), DGPSA, MAGFOR, Managua Nicaragua.
MT-5.4-02 – Manual de Preparación de Medios de Cultivo y Reactivos Químicos, Versión 1, Revisión 01, 2013, Laboratorio de Diagnóstico Veterinario y Microbiología de Alimentos (LCDVMA), DGPSA,MAGFOR, Managua Nicaragua.
6. Fundamentos de esta Instrucción
Se realizan las siguientes pruebas bioquímicas y serológicas a aquellos cultivos que por sus características en agar TSI y LIA sean sospechosos de ser Salmonella; examinar 3 tubos de TSI provenientes del medio TT (Hajna) y 3 tubos de TSI provenientes del medio RVm. Examinar al menos 6 tubos por cada 25 gr. de muestra. Si los cultivosen TSI parecen estar mezclados, o no dan bien definidas las características es necesario hacer una purificación, para obtener cultivos puros, procediendo así:
7. Descripción del procedimiento
7.1. Equipo y Material
EM 1. Incubadora a 35 ± 1°C.
EM 2. Baño de agua a 43 ± 0.2°C.
EM 3. Baño de agua a 42 ± 0.2°C.
EM 4. Baño de agua a 48 – 50°C.
EM 5. Refrigerador a 4 ± 1°C.
EM 6. Cajas dePetri estériles.
EM 7. Pipetas de 1 mL estériles.
EM 8. Gradillas.
EM 9. Portaobjetos.
EM 10. Microscopio.
EM 11. Tubos de ensayo con tapa rosca de 150 x 180 mm.
EM 12. Pipeteador automático.
EM 13. Frascos estériles con capacidad de 500 mL
EM 14. Cabina de flujo laminar.
EM 15. Asa de inoculación.
EM 16. Láminas portaobjetos.
7.2. Medios de Cultivos y Reactivos
MR 1. Agua Destilada...