Pruebas Bioquioquimicas

TSI AGAR
Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. Eltiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan pormedio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Fórmula (en gramos por litro) | Instrucciones |
Extracto de carne | 3.0 | Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentarcon agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo. |
Pluripeptona | 20.0 | |
Cloruro de sodio | 5.0 | |
Lactosa | 10.0 | |
Sacarosa | 10.0 | |
Glucosa | 1.0 | |
Sulfato de hierro y amonio | 0.2 | |
Tiosulfato de sodio | 0.2 | |Rojo de fenol | 0.025 | |
Agar | 13.0 | |
pH final: 7.3 ± 0.2 |
Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.
Incubación
A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico ácido/fondo ácido (picoamarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
Microorganismo | Pico/Fondo| Producción de gas | Producción deácido sulfhídrico |
E. coli ATCC 25922 | A/A | + | - |
K. pneumoniae ATCC 700603 | A/A | + | - |
P. mirabilis ATCC 43071 | K/A | + | + |
S. typhimurium ATCC 14028 | K/A | - | + |
S. enteritidis ATCC 13076 | K/A | + | + |
S. flexneri ATCC 12022 | K/A | - | - |
P. aeruginosa ATCC 27853 | K/K | - | - |
A: ácido
K: alcalino

Características delmedio: Medio preparado: rojo
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
COLOR: rojo ladrillo
INHIBIDORES: no tiene
INDICADOR: rojo fenol
SUSTRATOS PRINCIPALES: Lactosa, sacarosa y glucosa (la proporción en el medio de lactosa y sacarosa es de 10:1 con la glucosa)
SUSTRATOS SECUNDARIOS: tiosulfato sodico, peptona, citrato ferrico amoniacal y extractos.
Sesiembra por picadura profunda con aguja y luego se siembra por estria en el pico.

LISINA HIERRO AGAR. (LIA)
Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para eldesarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a...